Relación molar inserto:vector
Prepare la ligación por moléculas, no por masa: con 50 ng de un vector de 3000 pb, un inserto de 500 pb y una relación 3:1, debe añadir 25 ng de inserto. También verá los picomoles de cada fragmento. Gratis en su navegador.
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Ejemplo resuelto
- Masa del vector
- 50
- Longitud del vector
- 3 000
- Longitud del inserto
- 500
- Relación molar
- 3
- Unidad de longitud
- Bp
- Longitud del vector (pb)
- 3 000
- Longitud del inserto (pb)
- 500
- Masa del inserto
- 25
Una calculadora de la relación molar inserto:vector en una ligación indica cuántos nanogramos de ADN inserto debe añadir a una masa conocida de vector linealizado para que ambos fragmentos coincidan en la proporción molar elegida. Como un fragmento más largo pesa más por molécula, masas iguales no son moles iguales: un plásmido de 3 kb supera en masa a un inserto de 500 bp aproximadamente seis a uno, de modo que una ligación 1:1 mezclada con los mismos nanogramos dejaría la reacción sin inserto. La fórmula habitual escala la masa del vector por la razón de longitudes inserto/vector y luego por la proporción molar objetivo, por lo general 3:1 en extremos cohesivos o entre 1:1 y 5:1 al explorar condiciones.
Por qué nanogramos iguales no son una ligación 1:1
Las ligaciones de clonación molecular unen un vector linealizado y un inserto con T4 DNA ligase. La química depende de que coincidan extremos compatibles, es decir, de cantidades molares, no de las masas en escala de miligramos que informa un espectrofotómetro. El ADN de doble cadena tiene una masa aproximadamente constante por par de bases, por convención 650 gramos por mol por par de bases, así que el número de moles en una alícuota de nanogramos es inversamente proporcional a la longitud del fragmento.
Cincuenta nanogramos de un plásmido de 3000 bp son, por tanto, seis veces más moles que cincuenta nanogramos de un inserto de 500 bp. Si mezcla esas masas iguales habrá construido una reacción 1:6 inserto:vector, lo contrario del exceso de inserto 3:1 que recomiendan la mayoría de los protocolos de extremos cohesivos. La corrección es una proporción: la masa del inserto es la masa del vector por (longitud del inserto dividida por la del vector) por la relación molar inserto:vector objetivo.
Para 50 ng de vector de 3000 bp, un inserto de 500 bp y una relación 3:1, eso es 50 × (500 / 3000) × 3 = 25 ng. Las ligaciones de extremos romos suelen partir más cerca de 1:1 o 5:1 y siguen usando la misma identidad; solo cambia la relación. Esta calculadora aplica esa identidad y además informa los picomoles implícitos con 650 g/mol por par de bases para que pueda comparar una lectura NanoDrop con una tabla de protocolo molar sin abrir una hoja de cálculo.
Dónde aporta valor una calculadora de relación inserto:vector en ligación
Los laboratorios docentes y los cursos de clonación usan una calculadora de relación inserto:vector para que el alumnado deje de tratar los nanogramos como intercambiables y pueda mostrar los 25 ng de inserto que corresponden a 50 ng de un vector de 3 kb a 3:1. Las instalaciones centrales y los cuadernos de preparación de plásmidos mantienen la misma identidad junto a las lecturas del espectrofotómetro cuando un producto PCR es más corto que el esqueleto y una mezcla 1:1 en masa dejaría la reacción con poco inserto.
Los sitios de contenido que posicionan por una calculadora de relación inserto vector en ligación se benefician de un control en vivo cuyo camino gratuito en el navegador coincide con el de automatización prepago sobre el mismo módulo puro. La validación fallida no consume saldo.
Las búsquedas de temperatura de fusión de cebadores solapados o del diseño de solapes Gibson son intenciones distintas: quédese en esta página cuando las entradas sean dos tamaños de fragmento más una masa de vector y la salida los nanogramos de inserto para una relación molar objetivo.
Qué puede hacer con ella
Preparación de clonación con extremos cohesivos
Quien trabaja en el banco introduce 50 ng de un esqueleto de 3000 bp y un inserto PCR de 500 bp a 3:1 y pipetea a la ligación los 25 ng de inserto devueltos.
Preguntas frecuentes
¿Cómo se calcula la masa de ADN inserto para una ligación?
Un vector de 50 ng y 3000 bp con un inserto de 500 bp a 3:1 necesita 25 ng de inserto.
¿Por qué la relación inserto:vector por defecto es 3:1?
Las ligaciones T4 de extremos cohesivos suelen partir de un exceso molar triple de inserto para que más extremos de inserto encuentren extremos de vector.
¿Cuánto inserto añado a 50 ng de un vector de 3000 pb con 3:1?
Para un inserto de 500 pb, añada 25 ng. La calculadora multiplica 50 ng por 500 dividido entre 3000 y luego por la relación de 3, de modo que el inserto supera al vector tres a uno.
¿Por qué no puedo mezclar inserto y vector a partes iguales en nanogramos?
Porque un fragmento más largo pesa más por molécula. Cincuenta nanogramos de un plásmido de 3000 pb contienen seis veces más moléculas que cincuenta nanogramos de un inserto de 500 pb, así que masas iguales dan una reacción 1:6 en lugar de 3:1.
¿Qué relación conviene para una ligación de extremos romos?
Las ligaciones de extremos romos suelen empezar cerca de 1:1 o 5:1, y puede probar relaciones entre ambas. La fórmula es la misma; solo cambia la relación que introduce.
Herramientas relacionadas
Para desarrolladores — acceso por API
Todo lo de esta página está disponible por programación. Esta sección es para equipos que quieren integrarlo en sus sistemas; el resto puede usar la herramienta de arriba sin más.
Endpoint de API
¿Prefiere automatizarlo? Un POST autenticado crea la tarea; el resultado llega por webhook o enlace firmado. La misma capacidad también se ejecuta aquí en la web, por email y desde Telegram — y pronto también desde nuestra app.
Llámela desde su stack
curl -X POST https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio \
-H "Authorization: Bearer $KIT_KEY" \
-H "Content-Type: application/json" \
-d '{"vector_mass":50,"vector_length":3000,"insert_length":500}'const res = await fetch("https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio", {
method: "POST",
headers: {
"Authorization": `Bearer ${process.env.KIT_KEY}`,
"Content-Type": "application/json"
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body: JSON.stringify({
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"vector_length": 3000,
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});
const { task_id } = await res.json();import os, requests
res = requests.post(
"https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio",
headers={"Authorization": f"Bearer {os.environ['KIT_KEY']}"},
json={
"vector_mass": 50,
"vector_length": 3000,
"insert_length": 500
},
)
task_id = res.json()["task_id"]<?php
$res = file_get_contents("https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio", false, stream_context_create([
"http" => [
"method" => "POST",
"header" => "Authorization: Bearer " . getenv("KIT_KEY") . "\r\nContent-Type: application/json",
"content" => '{"vector_mass":50,"vector_length":3000,"insert_length":500}',
],
]));
$task = json_decode($res, true);body := bytes.NewBufferString(`{"vector_mass":50,"vector_length":3000,"insert_length":500}`)
req, _ := http.NewRequest("POST", "https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio", body)
req.Header.Set("Authorization", "Bearer "+os.Getenv("KIT_KEY"))
req.Header.Set("Content-Type", "application/json")
res, _ := http.DefaultClient.Do(req)Ejemplo de solicitud
{
"vector_mass": 50,
"vector_length": 3000,
"insert_length": 500
}Ejemplo de respuesta
{
"task_id": "tsk_a1b2c3d4e5f6a1b2c3d4e5f6",
"type": "bio.ligation_insert_vector_ratio",
"status": "queued",
"_links": {
"result": "/tasks/tsk_…/result"
}
}La API es asíncrona: la llamada devuelve un task_id al instante y el resultado llega por webhook. El polling está limitado a 1 req/s por tarea.
Precio
Precio publicado — sin tokens ni créditos inventados. Una tarea fallida no se cobra.
Límites
max_mass_ng | 1000000000000 |
max_length_bp | 1000000000 |
Errores
| HTTP | Código | Significado |
|---|---|---|
401 | unauthorized | API key ausente o inválida. |
402 | insufficient_balance | El saldo no cubre el precio de la tarea. |
404 | unknown_type | El tipo de tarea no existe. |
429 | rate_limited | Demasiadas peticiones. Use el webhook en vez de sondear. |
Notas técnicas
Introduzca la masa del vector en nanogramos y los dos tamaños de fragmento en pares de bases o kilopares; el mismo módulo determinista alimenta el ejecutor gratuito del navegador y la API, de modo que el cuaderno de laboratorio, una comprobación de deberes en un LMS y un script de preparación de clonación no discrepan nunca sobre si 50 ng de un vector de 3 kb necesitan 25 ng de un inserto de 500 bp a 3:1.
Contrato de entrada, forma de la respuesta y comportamiento ante errores
Esos fallos no se facturan. Empareje la masa con su propia tabla de tampón de ligasa; este extremo no elige unidades de enzima ni el tiempo de incubación. Envíe un cuerpo JSON con tres números obligatorios. vector_mass son los nanogramos de vector linealizado que pipeteará de verdad (alias vector_ng, ng_vector, vector). vector_length e insert_length son los dos tamaños de fragmento tras cualquier digestión de restricción o limpieza PCR; comparten length_unit, un enum de bp o kb que por defecto son pares de bases (alias unit, size_unit). El opcional molar_ratio es el objetivo molar inserto:vector y vale 3 por defecto, el punto de partida habitual en extremos cohesivos; los alias son ratio, insert_vector_ratio e iv_ratio. Cada campo numérico puede llegar como número JSON o como cadena decimal o científica. Si faltan campos obligatorios, hay cadenas vacías, valores no finitos, ceros, negativos o cifras fuera de los límites publicados, la petición falla con invalid_input que nombra el campo. Si tiene éxito, el cuerpo repite las entradas, informa vector_length_bp e insert_length_bp tras la conversión opcional a kilopares, devuelve insert_mass en nanogramos, mass_ratio como insert_mass dividido por vector_mass, y ratio_label del tipo 3:1. vector_pmol e insert_pmol usan 650 g/mol/bp, de modo que un vector de 50 ng y 3000 bp ronda 0.0256 pmol y un inserto 3:1 ronda 0.0769 pmol. formula reitera insert_mass = vector_mass × (insert_length / vector_length) × molar_ratio; formula_applied sustituye los números de esta llamada.
Dónde aporta valor una calculadora de relación inserto:vector en ligación
Como la implementación es parse puro de nivel A, cada llamada exitosa cuesta el precio base publicado $0.002 sin tokens de modelo ni red saliente. Mantenga masas y longitudes dentro de los techos declarados, fije insert_mass y formula_applied en las pruebas y obtendrá respuestas reproducibles de 25 nanogramos para el caso de manual 50 ng / 3000 bp / 500 bp / 3:1 en un cuaderno, un complemento LMS y una tubería de clonación.
Casos de integración
Fichas escolares de proporción molar
El alumnado comprueba que nanogramos iguales no son una ligación 1:1 y compara insert_mass con una línea hecha a mano 50 × (L_insert / L_vector) × ratio.
Oráculos de scripts de clonación y LMS
La automatización fija insert_mass para el caso de manual 3:1 e invalid_input cuando falta la longitud de un fragmento o no es positiva.
Preguntas técnicas
¿Puedo indicar los tamaños de fragmento en kb en lugar de bp?
Sí. Fije length_unit en kb (ambas longitudes comparten esa unidad). 3 kb y 0.5 kb con la misma masa y relación dan el mismo insert_mass que 3000 bp y 500 bp, porque la escala se cancela en la razón de longitudes.
¿La calculadora supone ADN de doble cadena?
Sí. insert_mass usa la razón de longitudes, independiente de la constante de masa por par de bases. vector_pmol e insert_pmol emplean el promedio convencional 650 g/mol/bp para dsDNA.
¿Cuánto cuesta la calculadora de relación inserto:vector en ligación?
La herramienta del navegador es gratuita. Las solicitudes API usan saldo prepago a $0.002 por llamada exitosa; la entrada inválida no se factura.