Ligations-Insert:Vektor-Verhältnis
Planen Sie die Ligation nach Molekülen statt nach Masse: Bei 50 ng eines 3000-bp-Vektors, einem 500-bp-Insert und dem Verhältnis 3:1 geben Sie 25 ng Insert zu. Die Picomol beider Fragmente werden ebenfalls angezeigt. Kostenlos in Ihrem Browser.
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Rechenbeispiel
- Vektormasse
- 50
- Vektorlänge
- 3.000
- Insertlänge
- 500
- Molverhältnis
- 3
- Längeneinheit
- Bp
- Vektorlänge (bp)
- 3.000
- Insertlänge (bp)
- 500
- Insertmasse
- 25
Ein Rechner für das molare Insert:Vektor-Verhältnis einer Ligation sagt Ihnen, wie viele Nanogramm Insert-DNA Sie zu einer bekannten Masse linearisierten Vektors geben, damit beide Fragmente das gewählte Molverhältnis erreichen. Weil ein längeres Fragment je Molekül schwerer ist, sind gleiche Massen keine gleichen Mole: ein 3 kb-Plasmid übertrifft ein 500 bp-Insert in der Masse etwa sechs zu eins, sodass eine 1:1-Ligation aus gleichen Nanogramm die Reaktion an Insert verarmen ließe. Die übliche Formel skaliert die Vektormasse mit dem Längenverhältnis Insert/Vektor und dann mit dem Ziel-Molverhältnis, meist 3:1 bei klebrigen Enden oder 1:1 bis 5:1, wenn Sie Bedingungen prüfen.
Warum gleiche Nanogramm keine 1:1-Ligation sind
Ligationen der molekularen Klonierung verbinden einen linearisierten Vektor und ein Insert mit T4 DNA ligase. Die Chemie hängt vom Zusammenstoßen kompatibler Enden ab, also von molaren Mengen, nicht von den milligrammgroßen Massen, die ein Spektralphotometer meldet. Doppelsträngige DNA hat eine näherungsweise konstante Masse je Basenpaar, konventionell 650 Gramm pro Mol je Basenpaar, sodass die Molzahl in einer Nanogramm-Aliquote umgekehrt proportional zur Fragmentlänge ist.
Fünfzig Nanogramm eines 3000 bp-Plasmids sind daher sechsmal so viele Mole wie fünfzig Nanogramm eines 500 bp-Inserts. Mischen Sie jene gleichen Massen, haben Sie eine 1:6-Insert:Vektor-Reaktion gebaut, das Gegenteil des 3:1-Insertexzesses, den die meisten Sticky-End-Protokolle empfehlen. Die Korrektur ist eine Proportion: die Insertmasse ist die Vektormasse mal (Insertlänge geteilt durch Vektorlänge) mal dem Ziel-Molverhältnis Insert:Vektor.
Für 50 ng eines 3000 bp-Vektors, ein 500 bp-Insert und ein 3:1-Verhältnis ergibt das 50 × (500 / 3000) × 3 = 25 ng. Ligationen glatter Enden starten oft näher bei 1:1 oder 5:1 und nutzen dieselbe Identität; nur das Verhältnis ändert sich. Dieser Rechner wendet jene Identität an und meldet außerdem die impliziten Pikomol mit 650 g/mol je Basenpaar, damit Sie eine NanoDrop-Ablesung mit einer molaren Protokolltabelle vergleichen können, ohne eine Tabelle zu öffnen.
Wo ein Rechner für das Ligations-Insert:Vektor-Verhältnis seinen Nutzen hat
Lehrlabore und Klonierungskurse nutzen einen Rechner für das Insert:Vektor-Verhältnis, damit Lernende Nanogramm nicht mehr als austauschbar behandeln und die 25 ng Insert zeigen können, die zu 50 ng eines 3 kb-Vektors bei 3:1 gehören. Kernanlagen und Plasmid-Vorbereitungshefte halten dieselbe Identität neben Spektralphotometer-Ablesungen, wenn ein PCR-Produkt kürzer als das Rückgrat ist und eine 1:1-Massenmischung die Reaktion an Insert verarmen ließe. Inhaltssites, die für einen Rechner des Ligations-Insert-Vektor-Verhältnisses rangieren, profitieren von einem lebenden Steuerelement, dessen kostenloser Browserpfad mit dem vorausbezahlten Automatisierungspfad auf demselben reinen Modul übereinstimmt.
Eine fehlgeschlagene Prüfung wird nicht berechnet. Verwandte Suchen nach der Schmelztemperatur überlappender Primer oder nach Gibson-Überlappungsentwurf sind andere Absichten: Bleiben Sie auf dieser Seite, wenn die Eingaben zwei Fragmentgrößen plus eine Vektormasse sind und die Ausgabe die Insert-Nanogramm für ein Ziel-Molverhältnis.
Anwendungsfälle
Klonierungsvorbereitung mit klebrigen Enden
Am Laborplatz gibt man 50 ng eines 3000 bp-Rückgrats und ein 500 bp-PCR-Insert bei 3:1 ein und pipettiert die zurückgegebenen 25 ng Insert in die Ligation.
Häufige Fragen
Wie berechnet man die Insert-DNA-Masse für eine Ligation?
Ein 50 ng-, 3000 bp-Vektor mit einem 500 bp-Insert bei 3:1 braucht 25 ng Insert.
Warum ist das Insert:Vektor-Verhältnis standardmäßig 3:1?
T4-Ligationen mit klebrigen Enden starten gewöhnlich mit einem dreifachen molaren Insertexzess, damit mehr Insertenden Vektorenden finden.
Wie viel Insert gebe ich zu 50 ng eines 3000-bp-Vektors bei 3:1?
Bei einem 500-bp-Insert geben Sie 25 ng zu. Der Rechner multipliziert 50 ng mit 500 geteilt durch 3000 und dann mit dem Verhältnis 3, sodass das Insert dreifach überwiegt.
Warum kann ich Insert und Vektor nicht in gleichen Nanogramm mischen?
Weil ein längeres Fragment pro Molekül mehr wiegt. Fünfzig Nanogramm eines 3000-bp-Plasmids enthalten sechsmal so viele Moleküle wie fünfzig Nanogramm eines 500-bp-Inserts, gleiche Massen ergeben also 1:6 statt 3:1.
Welches Verhältnis nehme ich für eine Ligation mit glatten Enden?
Ligationen mit glatten Enden beginnen oft näher bei 1:1 oder 5:1, und Sie können Verhältnisse dazwischen testen. Die Formel bleibt gleich; nur das eingegebene Verhältnis ändert sich.
Verwandte Tools
Für Entwickler — API-Zugang
Alles auf dieser Seite ist auch per API verfügbar. Dieser Abschnitt richtet sich an Teams, die es in ihre eigenen Systeme einbinden möchten; alle anderen nutzen einfach das Tool oben.
Endpunkt
Authentifizierung per Bearer-Token. Ein einziger POST stellt die Aufgabe in die Warteschlange; das Ergebnis erhalten Sie per Webhook oder über einen signierten Link.
Aufruf aus Ihrem Stack
curl -X POST https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio \
-H "Authorization: Bearer $KIT_KEY" \
-H "Content-Type: application/json" \
-d '{"vector_mass":50,"vector_length":3000,"insert_length":500}'const res = await fetch("https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio", {
method: "POST",
headers: {
"Authorization": `Bearer ${process.env.KIT_KEY}`,
"Content-Type": "application/json"
},
body: JSON.stringify({
"vector_mass": 50,
"vector_length": 3000,
"insert_length": 500
})
});
const { task_id } = await res.json();import os, requests
res = requests.post(
"https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio",
headers={"Authorization": f"Bearer {os.environ['KIT_KEY']}"},
json={
"vector_mass": 50,
"vector_length": 3000,
"insert_length": 500
},
)
task_id = res.json()["task_id"]<?php
$res = file_get_contents("https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio", false, stream_context_create([
"http" => [
"method" => "POST",
"header" => "Authorization: Bearer " . getenv("KIT_KEY") . "\r\nContent-Type: application/json",
"content" => '{"vector_mass":50,"vector_length":3000,"insert_length":500}',
],
]));
$task = json_decode($res, true);body := bytes.NewBufferString(`{"vector_mass":50,"vector_length":3000,"insert_length":500}`)
req, _ := http.NewRequest("POST", "https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio", body)
req.Header.Set("Authorization", "Bearer "+os.Getenv("KIT_KEY"))
req.Header.Set("Content-Type", "application/json")
res, _ := http.DefaultClient.Do(req)Beispiel-Anfrage
{
"vector_mass": 50,
"vector_length": 3000,
"insert_length": 500
}Beispiel-Antwort
{
"task_id": "tsk_a1b2c3d4e5f6a1b2c3d4e5f6",
"type": "bio.ligation_insert_vector_ratio",
"status": "queued",
"_links": {
"result": "/tasks/tsk_…/result"
}
}Die API arbeitet asynchron: Sie erhalten sofort eine task_id. Polling ist mit 1 Anfrage pro Sekunde erlaubt.
Preis
Der Preis steht auf der Seite – keine Tokens, keine Credits. Fehlgeschlagene Aufgaben werden nicht berechnet.
Limits
max_mass_ng | 1000000000000 |
max_length_bp | 1000000000 |
Fehler
| HTTP | Code | Bedeutung |
|---|---|---|
401 | unauthorized | Der API-Schlüssel fehlt oder ist ungültig – prüfen Sie den Authorization-Header (Bearer). |
402 | insufficient_balance | Ihr Guthaben reicht für diese Aufgabe nicht aus – Aufladungen verfallen nicht. |
404 | unknown_type | Unbekannter Aufgabentyp – prüfen Sie das Feld „type“ gegen den Katalog. |
429 | rate_limited | Zu viele Anfragen – warten Sie kurz; Polling ist mit 1 Anfrage pro Sekunde erlaubt. |
Technische Hinweise
Geben Sie die Vektormasse in Nanogramm und die beiden Fragmentgrößen in Basenpaaren oder Kilobasenpaaren ein; dasselbe deterministische Modul speist den kostenlosen Browser-Läufer und die API, sodass Laborheft, eine Hausaufgabenprüfung in einem LMS und ein Klonierungs-Vorbereitungsskript niemals darüber streiten, ob 50 ng eines 3 kb-Vektors 25 ng eines 500 bp-Inserts bei 3:1 brauchen.
Eingabevertrag, Antwortform und Fehlerverhalten
Koppeln Sie die Masse an Ihre eigene Ligase-Puffertabelle; dieser Endpunkt wählt weder Enzymeinheiten noch die Inkubationszeit. Senden Sie einen JSON-Körper mit drei Pflichtzahlen. vector_mass sind die Nanogramm linearisierten Vektors, die Sie wirklich pipettieren (Aliasse vector_ng, ng_vector, vector). vector_length und insert_length sind die beiden Fragmentgrößen nach jedem Restriktionsverdau oder PCR-Aufreinigen; sie teilen sich length_unit, ein Enum aus bp oder kb, das standardmäßig Basenpaare bedeutet (Aliasse unit, size_unit). Das optionale molar_ratio ist das molare Insert:Vektor-Ziel und steht standardmäßig auf 3, dem üblichen Startpunkt bei klebrigen Enden; die Aliasse sind ratio, insert_vector_ratio und iv_ratio. Jedes Zahlenfeld darf als JSON-Zahl oder als Dezimal- bzw. wissenschaftliche Zeichenkette ankommen. Fehlende Pflichtfelder, leere Ketten, nichtendliche Werte, Nullen, Negative und Zahlen außerhalb der veröffentlichten Grenzen scheitern mit invalid_input unter Nennung des Felds. Diese Fehlschläge werden nicht berechnet. Bei Erfolg wiederholt der Körper die Eingaben, meldet vector_length_bp und insert_length_bp nach der optionalen Kilobasenumrechnung, liefert insert_mass in Nanogramm, mass_ratio als insert_mass geteilt durch vector_mass und ratio_label wie 3:1. vector_pmol und insert_pmol nutzen 650 g/mol/bp, sodass ein 50 ng-, 3000 bp-Vektor etwa 0.0256 pmol und ein 3:1-Insert etwa 0.0769 pmol beträgt. formula wiederholt insert_mass = vector_mass × (insert_length / vector_length) × molar_ratio; formula_applied setzt die Zahlen dieses Aufrufs ein.
Wo ein Rechner für das Ligations-Insert:Vektor-Verhältnis seinen Nutzen hat
Weil die Umsetzung reines parse der Stufe A ist, kostet jeder erfolgreiche Aufruf den veröffentlichten Grundpreis $0.002 ohne Modellmarken und ohne ausgehendes Netz. Halten Sie Massen und Längen unter den erklärten Decken, nageln Sie insert_mass und formula_applied in Tests fest, und Sie erhalten nachvollziehbare 25-Nanogramm-Antworten für den Lehrbuchfall 50 ng / 3000 bp / 500 bp / 3:1 in einem Laborheft, einer LMS-Erweiterung und einer Klonierungsleitung.
Integrationsbeispiele
Unterrichtsblätter zum Molverhältnis
Lernende prüfen, dass gleiche Nanogramm keine 1:1-Ligation sind, und vergleichen insert_mass mit einer von Hand gerechneten Zeile 50 × (L_insert / L_vector) × ratio.
Orakel für Klonierungsskripte und LMS
Die Automatisierung nagelt insert_mass für den Lehrbuchfall 3:1 fest und invalid_input, wenn eine Fragmentlänge fehlt oder nicht positiv ist.
Technische Fragen
Kann man Fragmentgrößen in kb statt in bp eingeben?
Ja. Setzen Sie length_unit auf kb (beide Längen teilen sich diese Einheit). 3 kb und 0.5 kb bei gleicher Masse und gleichem Verhältnis ergeben dasselbe insert_mass wie 3000 bp und 500 bp, weil die Skala im Längenverhältnis entfällt.
Nimmt der Rechner doppelsträngige DNA an?
Ja. insert_mass nutzt das Längenverhältnis, unabhängig von der Masse-pro-Basenpaar-Konstante. vector_pmol und insert_pmol verwenden den konventionellen Mittelwert 650 g/mol/bp für dsDNA.
Was kostet der Rechner für das Ligations-Insert:Vektor-Verhältnis?
Das Browser-Werkzeug ist kostenlos. API-Anfragen nutzen vorausbezahltes Guthaben zu $0.002 je erfolgreichem Aufruf; ungültige Eingabe wird nicht berechnet.