نسبة الإدخال إلى الناقل في الربط
حضّر الربط بعدد الجزيئات لا بالكتلة: مع 50 نانوغرامًا من ناقل طوله 3000 زوج قاعدي ومُدخَل طوله 500 زوج قاعدي ونسبة 3:1، تضيف 25 نانوغرامًا من المُدخَل. ويظهر البيكومول لكل قطعة أيضًا. مجانية في متصفحك.
- مجاني
- يعمل في متصفحك
- دون تسجيل
- بياناتك لا تغادر جهازك
شغّل الأداة مجانًا
مثال محلول
- كتلة الناقل
- 50
- طول الناقل
- 3,000
- طول القطعة المدرجة
- 500
- النسبة المولية
- 3
- وحدة الطول
- Bp
- طول الناقل (bp)
- 3,000
- طول القطعة المدرجة (bp)
- 500
- كتلة القطعة المدرجة
- 25
تبيّن حاسبة النسبة المولية إدخال:ناقل في الربط كم نانوغراماً من DNA المُدخل ينبغي أن تضيف إلى كتلة معلومة من ناقل مخطَّط حتى يلتقي القطعان عند النسبة المولية المختارة. لأن القطعة الأطول أثقل لكل جزيء، ليست الكتل المتساوية مولات متساوية: يفوق بلازميد 3 kb المُدخل ذا 500 bp في الكتلة بنحو ستة إلى واحد، فربط 1:1 ممزوج بذات النانوغرامات يُفقِر التفاعل من المُدخل. تضاعف الصيغة المعتادة كتلة الناقل بنسبة طولي الإدخال إلى الناقل ثم بالنسبة المولية المستهدفة، وغالباً 3:1 للنهايات اللاصقة أو بين 1:1 و5:1 عند استكشاف الشروط.
لماذا النانوغرامات المتساوية ليست ربطاً 1:1
تربط تفاعلات الاستنساخ الجزيئي ناقلاً مخطَّطاً ومُدخلاً بإنزيم T4 DNA ligase. تهتم الكيمياء بتصادم نهايات متوافقة، أي بالكميات المولية، لا بكتل مقياس المليغرام التي يبلّغها مقياس الطيف. لـ DNA مزدوج السلسلة كتلة شبه ثابتة لكل زوج قواعد، واصطلاحاً 650 غراماً لكل مول لكل زوج قواعد، فعدد المولات في حصة نانوغرام يتناسب عكسياً مع طول القطعة.
إذن خمسون نانوغراماً من بلازميد 3000 bp هي ستة أضعاف مولات خمسين نانوغراماً من مُدخل 500 bp. إن مزجت تلك الكتل المتساوية بنيت تفاعلاً 1:6 إدخال:ناقل، عكس فائض الإدخال 3:1 الذي توصي به أكثر بروتوكولات النهايات اللاصقة. التصحيح تناسب: كتلة المُدخل تساوي كتلة الناقل مضروبة في (طول المُدخل مقسوماً على طول الناقل) مضروبة في النسبة المولية إدخال:ناقل المستهدفة.
لـ 50 ng من ناقل 3000 bp ومُدخل 500 bp ونسبة 3:1 يكون ذلك 50 × (500 / 3000) × 3 = 25 ng. تبدأ ربطات النهايات الصماء غالباً أقرب إلى 1:1 أو 5:1 وتستخدم الهوية نفسها؛ لا تتغير إلا النسبة. تطبق هذه الحاسبة تلك الهوية وتبلّغ أيضاً البيكومولات الضمنية بـ 650 g/mol لكل زوج قواعد حتى تقارن قراءة NanoDrop بجدول بروتوكول مولي دون فتح ورقة حساب.
أين تبرّر حاسبة نسبة الإدخال إلى الناقل في الربط استخدامها
تستخدم مختبرات التدريس ودورات الاستنساخ حاسبة نسبة إدخال:ناقل كي يكفّ المتعلمون عن معاملة النانوغرامات كأنها قابلة للتبديل ويُظهروا 25 ng من المُدخل التي تناسب 50 ng من ناقل 3 kb عند 3:1. تبقي المنشآت المركزية ودفاتر تحضير البلازميد الهوية نفسها إلى جوار قراءات مقياس الطيف عندما يكون ناتج PCR أقصر من الهيكل ويخلّط 1:1 بالكتلة يُفقِر التفاعل من المُدخل. تستفيد مواقع المحتوى التي تتصدر بحث حاسبة نسبة إدخال ناقل في الربط من عنصر حيّ يطابق مساره المجاني في المتصفح مسار الأتمتة المدفوع مسبقاً على الوحدة النقية نفسها.
لا يستهلك التحقق الفاشل الرصيد. بحث درجة انصهار بادئات متراكبة أو تصميم تراكب Gibson مقاصد أخرى: ابقَ في هذه الصفحة عندما يكون الإدخال طولي قطعتين وكتلة ناقل والإخراج نانوغرامات المُدخل لنسبة مولارية مستهدفة.
حالات الاستخدام
تحضير استنساخ بالنهايات اللاصقة
على المنضدة يُدخل 50 ng من هيكل 3000 bp ومُدخل PCR طوله 500 bp عند 3:1 ثم يُمصّ إلى الربط 25 ng من المُدخل المعادة.
الأسئلة الشائعة
كيف تُحسب كتلة DNA المُدخل لعملية ربط؟
ناقل 50 ng و3000 bp مع مُدخل 500 bp عند 3:1 يحتاج 25 ng من المُدخل.
لماذا النسبة الافتراضية إدخال:ناقل هي 3:1؟
تبدأ ربطات T4 ذات النهايات اللاصقة عادة بفائض مولي ثلاثي من المُدخل حتى تجد نهايات إدخال أكثر نهايات الناقل.
كم أضيف من المُدخَل إلى 50 نانوغرامًا من ناقل طوله 3000 زوج قاعدي بنسبة 3:1؟
لمُدخَل طوله 500 زوج قاعدي تضيف 25 نانوغرامًا. تضرب الحاسبة 50 في 500 مقسومًا على 3000 ثم في النسبة 3، فيفوق عدد جزيئات المُدخَل الناقل بثلاثة أضعاف.
لماذا لا أخلط المُدخَل والناقل بكميات متساوية بالنانوغرام؟
لأن القطعة الأطول أثقل لكل جزيء. خمسون نانوغرامًا من بلازميد طوله 3000 زوج قاعدي تضم جزيئات أكثر بست مرات من خمسين نانوغرامًا من مُدخَل طوله 500، فتعطي الكتل المتساوية تفاعلًا بنسبة 1:6 بدلًا من 3:1.
ما النسبة المناسبة لربط النهايات المصمتة؟
يبدأ ربط النهايات المصمتة غالبًا قرب 1:1 أو 5:1، ويمكنك تجربة نسب بينهما. تبقى المعادلة نفسها، ولا يتغير إلا النسبة التي تدخلها.
أدوات ذات صلة
للمطوّرين — الوصول عبر API
كل ما في هذه الصفحة متاح برمجيًا. هذا القسم موجّه للفرق التقنية التي تريد ربط الأداة بأنظمتها الخاصة؛ بقية المستخدمين يمكنهم استخدام الأداة أعلاه مباشرة دون الحاجة لقراءة ما يلي.
الـEndpoint
صادِق على طلبك بترويسة Bearer، وأرسل طلب POST واحدًا لتدخل مهمتك قائمة التنفيذ فورًا؛ ثم تستلم النتيجة عبر webhook أو رابط موقّع.
استدعِ الخدمة من بيئتك
curl -X POST https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio \
-H "Authorization: Bearer $KIT_KEY" \
-H "Content-Type: application/json" \
-d '{"vector_mass":50,"vector_length":3000,"insert_length":500}'const res = await fetch("https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio", {
method: "POST",
headers: {
"Authorization": `Bearer ${process.env.KIT_KEY}`,
"Content-Type": "application/json"
},
body: JSON.stringify({
"vector_mass": 50,
"vector_length": 3000,
"insert_length": 500
})
});
const { task_id } = await res.json();import os, requests
res = requests.post(
"https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio",
headers={"Authorization": f"Bearer {os.environ['KIT_KEY']}"},
json={
"vector_mass": 50,
"vector_length": 3000,
"insert_length": 500
},
)
task_id = res.json()["task_id"]<?php
$res = file_get_contents("https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio", false, stream_context_create([
"http" => [
"method" => "POST",
"header" => "Authorization: Bearer " . getenv("KIT_KEY") . "\r\nContent-Type: application/json",
"content" => '{"vector_mass":50,"vector_length":3000,"insert_length":500}',
],
]));
$task = json_decode($res, true);body := bytes.NewBufferString(`{"vector_mass":50,"vector_length":3000,"insert_length":500}`)
req, _ := http.NewRequest("POST", "https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio", body)
req.Header.Set("Authorization", "Bearer "+os.Getenv("KIT_KEY"))
req.Header.Set("Content-Type", "application/json")
res, _ := http.DefaultClient.Do(req)مثال على الطلب
{
"vector_mass": 50,
"vector_length": 3000,
"insert_length": 500
}مثال على الاستجابة
{
"task_id": "tsk_a1b2c3d4e5f6a1b2c3d4e5f6",
"type": "bio.ligation_insert_vector_ratio",
"status": "queued",
"_links": {
"result": "/tasks/tsk_…/result"
}
}الواجهة غير متزامنة: تستلم task_id فور الإرسال، ويمكنك الاستعلام عن الحالة بمعدل طلب واحد في الثانية.
الأسعار
السعر معلن كما تراه: لا tokens ولا نظام نقاط؛ وإن فشلت المهمة فلن تُحاسَب عليها.
الحدود
max_mass_ng | 1000000000000 |
max_length_bp | 1000000000 |
الأخطاء
| HTTP | الرمز | المعنى |
|---|---|---|
401 | unauthorized | مفتاح الوصول مفقود أو غير صالح؛ تحقق من ترويسة Bearer في طلبك. |
402 | insufficient_balance | رصيدك لا يكفي لتنفيذ هذه المهمة؛ أعد شحن الرصيد ثم أعد المحاولة. |
404 | unknown_type | نوع المهمة المطلوب غير موجود في الكتالوج — راجع الاسم المرسل في الطلب. |
429 | rate_limited | تجاوزت الحد المسموح من الطلبات؛ انتظر قليلًا ثم أعد المحاولة. |
ملاحظات تقنية
أدخل كتلة الناقل بالنانوغرام وطولي القطعتين بأزواج القواعد أو الكيلوأزواج؛ تشغّل الوحدة الحتمية نفسها مشغّل المتصفح المجاني وواجهة API، فلا يختلف دفتر المختبر وفحص واجب في LMS ونص إعداد الاستنساخ على ما إذا كان 50 ng من ناقل 3 kb يحتاج 25 ng من مُدخل 500 bp عند 3:1.
عقد الإدخال وشكل الاستجابة وسلوك الخطأ
لا تُفوتر تلك الإخفاقات. اقرن الكتلة بجدول منظم الربط الخاص بك؛ هذه النهاية لا تختار وحدات الإنزيم ولا زمن الحضانة. أرسل جسماً JSON فيه ثلاثة أرقام إلزامية. vector_mass هو نانوغرامات الناقل المخطَّط التي ستمصّها فعلاً (الأسماء البديلة vector_ng وng_vector وvector). vector_length وinsert_length هما طولا القطعتين بعد أي هضم تقييد أو تنقية PCR؛ يشتركان في length_unit، وهو تعداد bp أو kb وافتراضه أزواج القواعد (الأسماء البديلة unit وsize_unit). الاختياري molar_ratio هو هدف إدخال:ناقل المولي وافتراضه 3، نقطة الانطلاق المعتادة للنهايات اللاصقة؛ والأسماء البديلة ratio وinsert_vector_ratio وiv_ratio. قد يصل كل حقل رقمي عدداً JSON أو سلسلة عشرية أو علمية. غياب الحقول الإلزامية والسلاسل الفارغة والقيم غير المنتهية والأصفار والسالبة والأرقام خارج الحدود المنشورة تفشل بـ invalid_input مع تسمية الحقل. عند النجاح يعيد الجسم المدخلات، ويبلّغ vector_length_bp وinsert_length_bp بعد التحويل الاختياري إلى كيلوأزواج، ويعيد insert_mass بالنانوغرام وmass_ratio بوصفها insert_mass مقسومة على vector_mass وratio_label من قبيل 3:1. يستعمل vector_pmol وinsert_pmol القيمة 650 g/mol/bp، فناقل 50 ng و3000 bp نحو 0.0256 pmol ومُدخل 3:1 نحو 0.0769 pmol. تعيد formula عبارة insert_mass = vector_mass × (insert_length / vector_length) × molar_ratio؛ وتضع formula_applied أرقام هذه الدعوة.
أين تبرّر حاسبة نسبة الإدخال إلى الناقل في الربط استخدامها
ولأن التنفيذ تحليل خالص من المستوى A، تكلف كل دعوة ناجحة السعر الأساسي المنشور $0.002 بلا رموز نموذج ولا شبكة خارجة. أبقِ الكتل والأطوال داخل الأسقف المعلنة، وثبّت insert_mass وformula_applied في الاختبارات، فتحصل على إجابات قابلة للإعادة من 25 نانوغراماً لحالة الكتاب 50 ng / 3000 bp / 500 bp / 3:1 في دفتر وإضافة LMS وأنبوب استنساخ.
حالات التكامل
أوراق صفّ للنسبة المولية
يتحقق المتعلمون من أن النانوغرامات المتساوية ليست ربطاً 1:1 ويقارنون insert_mass بسطر محسوب يدوياً 50 × (L_insert / L_vector) × ratio.
عرّافو نصوص الاستنساخ وLMS
تثبّت الأتمتة insert_mass لحالة الكتاب 3:1 وinvalid_input عندما يغيب طول قطعة أو لا يكون موجباً.
أسئلة تقنية
هل يمكن إدخال أطوال القطع بوحدة kb بدل bp؟
نعم. اضبط length_unit على kb (يشترك الطولان في تلك الوحدة). 3 kb و0.5 kb عند الكتلة والنسبة نفسيهما يعطيان insert_mass نفسه لـ 3000 bp و500 bp، لأن المقياس يُلغى في نسبة الأطوال.
هل تفترض الحاسبة DNA مزدوج السلسلة؟
نعم. يستخدم insert_mass نسبة الأطوال المستقلة عن ثابت الكتلة لكل زوج قواعد. يستعمل vector_pmol وinsert_pmol المتوسط الاصطلاحي 650 g/mol/bp لـ dsDNA.
كم تكلفة حاسبة نسبة الإدخال إلى الناقل في الربط؟
أداة المتصفح مجانية. تستخدم طلبات API رصيداً مدفوعاً مسبقاً بسعر $0.002 لكل دعوة ناجحة؛ لا تُفوتر المدخلات غير الصالحة.