Rapport molaire insert:vecteur
Préparez la ligation en molécules, pas en masse : avec 50 ng d'un vecteur de 3000 pb, un insert de 500 pb et un rapport 3:1, ajoutez 25 ng d'insert. Les picomoles de chaque fragment sont aussi affichées. Gratuit dans votre navigateur.
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Exemple résolu
- Masse du vecteur
- 50
- Longueur du vecteur
- 3 000
- Longueur de l'insert
- 500
- Rapport molaire
- 3
- Unité de longueur
- Bp
- Longueur du vecteur (pb)
- 3 000
- Longueur de l'insert (pb)
- 500
- Masse de l'insert
- 25
Un calculateur du rapport molaire insert:vecteur dans une ligature indique combien de nanogrammes d'ADN insert vous devez ajouter à une masse connue de vecteur linéarisé pour que les deux fragments atteignent le rapport molaire choisi. Parce qu'un fragment plus long est plus lourd par molécule, des masses égales ne sont pas des moles égales : un plasmide de 3 kb surpasse en masse un insert de 500 bp d'environ six pour un, si bien qu'une ligature 1:1 mélangée à nanogrammes égaux priverait la réaction d'insert. La formule usuelle met à l'échelle la masse du vecteur par le rapport des longueurs insert/vecteur puis par le rapport molaire visé, en général 3:1 pour les extrémités cohésives ou entre 1:1 et 5:1 lorsque vous explorez des conditions.
Pourquoi des nanogrammes égaux ne font pas une ligature 1:1
Les ligatures de clonage moléculaire joignent un vecteur linéarisé et un insert avec T4 DNA ligase. La chimie dépend de la rencontre d'extrémités compatibles, donc de quantités molaires, non des masses à l'échelle du milligramme qu'un spectrophotomètre rapporte. L'ADN double brin a une masse à peu près constante par paire de bases, par convention 650 grammes par mole par paire de bases, si bien que le nombre de moles dans une aliquote de nanogrammes est inversement proportionnel à la longueur du fragment.
Cinquante nanogrammes d'un plasmide de 3000 bp sont donc six fois plus de moles que cinquante nanogrammes d'un insert de 500 bp. Mélanger ces masses égales construit une réaction 1:6 insert:vecteur, l'inverse de l'excès d'insert 3:1 que recommandent la plupart des protocoles à extrémités cohésives. La correction est une proportion : la masse d'insert égale la masse de vecteur fois (longueur d'insert divisée par celle du vecteur) fois le rapport molaire insert:vecteur visé.
Pour 50 ng de vecteur de 3000 bp, un insert de 500 bp et un rapport 3:1, cela donne 50 × (500 / 3000) × 3 = 25 ng. Les ligatures à extrémités franches partent souvent plus près de 1:1 ou 5:1 et emploient encore la même identité ; seul le rapport change. Ce calculateur applique cette identité et signale aussi les picomoles implicites avec 650 g/mol par paire de bases afin que vous puissiez comparer une lecture NanoDrop à une table de protocole molaire sans ouvrir un tableur.
Où un calculateur de rapport insert:vecteur en ligature trouve son utilité
Les laboratoires d'enseignement et les cours de clonage utilisent un calculateur de rapport insert:vecteur pour que les apprenants cessent de traiter les nanogrammes comme interchangeables et puissent montrer les 25 ng d'insert qui vont avec 50 ng d'un vecteur de 3 kb à 3:1. Les plateformes centrales et les cahiers de préparation de plasmide gardent la même identité à côté des lectures du spectrophotomètre lorsqu'un produit PCR est plus court que le squelette et qu'un mélange 1:1 en masse sous-alimenterait la réaction en insert.
Les sites de contenu qui se classent sur un calculateur de rapport insert vecteur en ligature bénéficient d'un contrôle vivant dont le chemin gratuit dans le navigateur coïncide avec le chemin d'automatisation prépayé sur le même module pur. Une validation en échec ne consomme pas le solde.
Les recherches de température de fusion d'amorces chevauchantes ou de conception de chevauchement Gibson sont d'autres intentions : restez sur cette page lorsque les entrées sont deux tailles de fragment plus une masse de vecteur et la sortie les nanogrammes d'insert pour un rapport molaire visé.
Cas d’usage
Préparation de clonage à extrémités cohésives
Au banc, on saisit 50 ng d'un squelette de 3000 bp et un insert PCR de 500 bp à 3:1, puis on pipette dans la ligature les 25 ng d'insert renvoyés.
Questions fréquentes
Comment calcule-t-on la masse d'ADN insert pour une ligature ?
Un vecteur de 50 ng et 3000 bp avec un insert de 500 bp à 3:1 exige 25 ng d'insert.
Pourquoi le rapport insert:vecteur par défaut est-il 3:1 ?
Les ligatures T4 à extrémités cohésives partent en général d'un excès molaire triple d'insert afin que davantage d'extrémités d'insert trouvent celles du vecteur.
Combien d'insert ajouter à 50 ng d'un vecteur de 3000 pb en 3:1 ?
Pour un insert de 500 pb, ajoutez 25 ng. Le calculateur multiplie 50 ng par 500 divisé par 3000, puis par le rapport de 3, de sorte que l'insert dépasse le vecteur à trois contre un.
Pourquoi ne pas mélanger insert et vecteur à masses égales ?
Parce qu'un fragment plus long pèse plus lourd par molécule. Cinquante nanogrammes d'un plasmide de 3000 pb contiennent six fois plus de molécules que cinquante nanogrammes d'un insert de 500 pb : des masses égales donnent donc une réaction 1:6 au lieu de 3:1.
Quel rapport choisir pour une ligation à bouts francs ?
Les ligations à bouts francs démarrent souvent plus près de 1:1 ou de 5:1, et vous pouvez tester les rapports entre les deux. La formule reste la même ; seul le rapport saisi change.
Outils associés
Pour les développeurs — accès API
Tout sur cette page est disponible par programmation. Cette section s'adresse aux équipes qui veulent l'intégrer à leurs systèmes ; les autres peuvent simplement utiliser l'outil ci-dessus.
Endpoint
Authentification par jeton Bearer : un seul POST met la tâche en file d’attente, et le résultat vous parvient par webhook ou lien signé.
Appeler depuis votre stack
curl -X POST https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio \
-H "Authorization: Bearer $KIT_KEY" \
-H "Content-Type: application/json" \
-d '{"vector_mass":50,"vector_length":3000,"insert_length":500}'const res = await fetch("https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio", {
method: "POST",
headers: {
"Authorization": `Bearer ${process.env.KIT_KEY}`,
"Content-Type": "application/json"
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body: JSON.stringify({
"vector_mass": 50,
"vector_length": 3000,
"insert_length": 500
})
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const { task_id } = await res.json();import os, requests
res = requests.post(
"https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio",
headers={"Authorization": f"Bearer {os.environ['KIT_KEY']}"},
json={
"vector_mass": 50,
"vector_length": 3000,
"insert_length": 500
},
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task_id = res.json()["task_id"]<?php
$res = file_get_contents("https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio", false, stream_context_create([
"http" => [
"method" => "POST",
"header" => "Authorization: Bearer " . getenv("KIT_KEY") . "\r\nContent-Type: application/json",
"content" => '{"vector_mass":50,"vector_length":3000,"insert_length":500}',
],
]));
$task = json_decode($res, true);body := bytes.NewBufferString(`{"vector_mass":50,"vector_length":3000,"insert_length":500}`)
req, _ := http.NewRequest("POST", "https://api.kit.forhosting.com/bio/ligation-insert-vector-ratio", body)
req.Header.Set("Authorization", "Bearer "+os.Getenv("KIT_KEY"))
req.Header.Set("Content-Type", "application/json")
res, _ := http.DefaultClient.Do(req)Exemple de requête
{
"vector_mass": 50,
"vector_length": 3000,
"insert_length": 500
}Exemple de réponse
{
"task_id": "tsk_a1b2c3d4e5f6a1b2c3d4e5f6",
"type": "bio.ligation_insert_vector_ratio",
"status": "queued",
"_links": {
"result": "/tasks/tsk_…/result"
}
}L’API est asynchrone : chaque appel renvoie un task_id immédiatement, puis vous interrogez l’état à raison d’une requête par seconde.
Tarifs
Le prix est publié, sans tokens ni crédits. Une tâche qui échoue n’est pas facturée.
Limites
max_mass_ng | 1000000000000 |
max_length_bp | 1000000000 |
Erreurs
| HTTP | Code | Signification |
|---|---|---|
401 | unauthorized | Clé API absente ou invalide : vérifiez l’en-tête Authorization. |
402 | insufficient_balance | Solde insuffisant : rechargez votre compte pour lancer cette tâche. |
404 | unknown_type | Type de tâche inconnu : vérifiez le champ type de votre requête. |
429 | rate_limited | Trop de requêtes : ralentissez la cadence, puis réessayez. |
Notes techniques
Saisissez la masse du vecteur en nanogrammes et les deux tailles de fragment en paires de bases ou kilopaires ; le même module déterministe alimente l'exécuteur gratuit du navigateur et l'API, de sorte que le cahier de laboratoire, une vérification de devoir dans un LMS et un script de préparation de clonage ne divergent jamais sur le fait que 50 ng d'un vecteur de 3 kb exigent 25 ng d'un insert de 500 bp à 3:1.
Contrat d'entrée, forme de la réponse et comportement d'erreur
Associez la masse à votre propre table de tampon de ligase ; ce point d'accès ne choisit ni les unités d'enzyme ni le temps d'incubation. Envoyez un corps JSON avec trois nombres obligatoires. vector_mass est les nanogrammes de vecteur linéarisé que vous pipeterez réellement (alias vector_ng, ng_vector, vector). vector_length et insert_length sont les deux tailles de fragment après toute digestion de restriction ou purification PCR ; elles partagent length_unit, un enum de bp ou kb qui vaut par défaut les paires de bases (alias unit, size_unit). L'optionnel molar_ratio est la cible molaire insert:vecteur et vaut 3 par défaut, le point de départ habituel pour les extrémités cohésives ; les alias sont ratio, insert_vector_ratio et iv_ratio. Chaque champ numérique peut arriver comme nombre JSON ou comme chaîne décimale ou scientifique. Champs obligatoires manquants, chaînes vides, valeurs non finies, zéros, négatifs et chiffres hors des limites publiées échouent avec invalid_input qui nomme le champ. Ces échecs ne sont pas facturés. En cas de succès le corps répète les entrées, signale vector_length_bp et insert_length_bp après la conversion facultative en kilopaires, renvoie insert_mass en nanogrammes, mass_ratio comme insert_mass divisé par vector_mass, et ratio_label du type 3:1. vector_pmol et insert_pmol utilisent 650 g/mol/bp, donc un vecteur de 50 ng et 3000 bp fait environ 0.0256 pmol et un insert 3:1 environ 0.0769 pmol. formula répète insert_mass = vector_mass × (insert_length / vector_length) × molar_ratio ; formula_applied substitue les nombres de cet appel.
Où un calculateur de rapport insert:vecteur en ligature trouve son utilité
Comme l'implémentation est du parse pur de niveau A, chaque appel réussi coûte le prix de base publié $0.002 sans jetons de modèle ni réseau sortant. Gardez masses et longueurs sous les plafonds déclarés, figez insert_mass et formula_applied dans les tests, et vous obtenez des réponses reproductibles de 25 nanogrammes pour le cas de manuel 50 ng / 3000 bp / 500 bp / 3:1 dans un cahier, une extension LMS et un pipeline de clonage.
Cas d'intégration
Fiches de cours sur le rapport molaire
Les apprenants vérifient que des nanogrammes égaux ne font pas une ligature 1:1 et comparent insert_mass à une ligne calculée à la main 50 × (L_insert / L_vector) × ratio.
Oracles de scripts de clonage et de LMS
L'automatisation fige insert_mass pour le cas de manuel 3:1 et invalid_input lorsqu'une longueur de fragment manque ou n'est pas positive.
Questions techniques
Puis-je saisir les tailles de fragment en kb plutôt qu'en bp ?
Oui. Réglez length_unit sur kb (les deux longueurs partagent cette unité). 3 kb et 0.5 kb à la même masse et au même rapport donnent le même insert_mass que 3000 bp et 500 bp, car l'échelle s'annule dans le rapport des longueurs.
Le calculateur suppose-t-il de l'ADN double brin ?
Oui. insert_mass utilise le rapport des longueurs, indépendant de la constante de masse par paire de bases. vector_pmol et insert_pmol emploient la moyenne conventionnelle 650 g/mol/bp pour dsDNA.
Combien coûte le calculateur de rapport insert:vecteur en ligature ?
L'outil du navigateur est gratuit. Les requêtes API utilisent un solde prépayé à $0.002 par appel réussi ; une entrée invalide n'est pas facturée.