Calculateur de concentration d'ADN

Un calculateur de concentration d'ADN convertit une lecture de spectrophotomètre à 260 nanomètres en nanogrammes par microlitre selon l'identité habituelle de l'ADN double brin : la concentration vaut A260 fois 50 fois le facteur de dilution. Une unité d'absorbance à 260 nm sur un trajet d'un centimètre correspond à 50 microgrammes de dsDNA par millilitre, et ce chiffre est numériquement identique à 50 nanogrammes par microlitre, l'unité que les cahiers de clonage et de qPCR pipettent réellement. Si la cuve ou le piédestal NanoDrop contenait une aliquote diluée, vous multipliez par le facteur de dilution afin que le résultat soit la concentration du stock, et non celle du puits dilué.

Comment A260 devient des nanogrammes par microlitre

Les acides nucléiques absorbent la lumière ultraviolette avec un maximum près de 260 nanomètres parce que les bases aromatiques ont des systèmes de doubles liaisons conjuguées. Pour l'ADN double brin, la convention de la communauté, écrite dans tous les manuels de clonage moléculaire et dans chaque SOP NanoDrop ou de cuve, est qu'une absorbance de 1.000 à 260 nm à travers un trajet optique d'un centimètre correspond à 50 microgrammes de dsDNA par millilitre.

Microgrammes par millilitre et nanogrammes par microlitre sont le même nombre, donc l'identité au banc est concentration en ng/µL égale à A260 fois 50. Lorsque l'aliquote dans la cuve ou sur le piédestal n'est pas le stock non dilué — une dilution 1-in-10 d'une miniprep, une dilution 1-in-50 d'une purification PCR — vous multipliez par ce facteur afin que la concentration rapportée soit le stock que vous pipetterez ensuite, et non le puits dilué que vous venez de mesurer.

Il n'estime pas la pureté à partir de A260/A280, ne convertit pas en molarité et ne choisit pas un trajet optique autre que la convention d'un centimètre déjà intégrée au facteur 50. Ce sont d'autres recherches. Une lecture de 0.50 sur une dilution au dixième donne donc 0.50 × 50 × 10 = 250 ng/µL de stock dsDNA ; une lecture de 0.80 sur un échantillon non dilué, facteur de dilution 1, donne 40 ng/µL.

Saisissez le facteur de dilution égal à 1 lorsque vous avez mesuré le stock lui-même.

Où un calculateur de concentration d'ADN justifie son usage

Les laboratoires d'enseignement et les cours de biologie moléculaire utilisent un calculateur de concentration d'ADN pour que les apprenants cessent de traiter un A260 brut comme une concentration et puissent montrer les 250 ng/µL qui correspondent à une lecture de 0.50 sur une dilution de miniprep au dixième. Les plateformes centrales et les cahiers de préparation de plasmides gardent la même identité à côté des impressions du spectrophotomètre lorsqu'un NanoDrop indique 0.82 sur une dilution au double et que le stock qui entre dans une ligature vaut 82 ng/µL.

Les scripts de clonage à haut débit, les feuilles de courbe étalon de qPCR et les oracles de devoirs d'un LMS ont besoin d'un parse déterministe qui refuse une absorbance nulle ou manquante au lieu de multiplier et de renvoyer en silence zéro nanogramme.

Les sites de contenu qui se classent pour un calculateur de concentration d'ADN bénéficient d'un contrôle en direct dont le chemin gratuit dans le navigateur coïncide avec le chemin d'automatisation prépayé sur le même module pur, et ils ne doivent pas cannibaliser la recherche distincte d'un calculateur de masse insert:vecteur en ligature : cette requête veut des nanogrammes d'insert à partir de longueurs de fragment, pas des ng/µL à partir d'un A260. Une validation échouée ne consomme pas le solde.

Les recherches de concentration d'ARN à 40 ng/µL par A260 ou de facteurs d'oligo près de 33 sont d'autres intentions : restez sur cette page lorsque l'acide nucléique est de l'ADN double brin et que l'unité de sortie est le nanogramme par microlitre.