Calculadora de concentración de ADN

Una calculadora de concentración de ADN convierte una lectura de espectrofotómetro a 260 nanómetros en nanogramos por microlitro mediante la identidad habitual del ADN de doble cadena: la concentración es A260 por 50 por el factor de dilución. Una unidad de absorbancia a 260 nm en un camino de un centímetro corresponde a 50 microgramos de dsDNA por mililitro, y esa cifra es numéricamente idéntica a 50 nanogramos por microlitro, la unidad que de verdad pipetean los cuadernos de clonación y de qPCR. Si la cubeta o el pedestal NanoDrop contenía una alícuota diluida, se multiplica por el pliegue de dilución para que el resultado sea la concentración de la disolución madre, no la del pocillo diluido.

Cómo A260 se convierte en nanogramos por microlitro

Los ácidos nucleicos absorben luz ultravioleta con un máximo cerca de 260 nanómetros porque las bases aromáticas tienen sistemas de dobles enlaces conjugados. Para el ADN de doble cadena, la convención de la comunidad, escrita en todos los manuales de clonación molecular y en cada SOP de NanoDrop o de cubeta, es que una absorbancia de 1.000 a 260 nm a través de un camino óptico de un centímetro corresponde a 50 microgramos de dsDNA por mililitro.

Microgramos por mililitro y nanogramos por microlitro son el mismo número, así que la identidad de banco es concentración en ng/µL igual a A260 por 50. Cuando la alícuota en la cubeta o en el pedestal no es la disolución madre sin diluir — una dilución 1-in-10 de una miniprep, una dilución 1-in-50 de una limpieza PCR — se multiplica por ese pliegue para que la concentración informada sea la madre que pipeteará después, no el pocillo diluido que acaba de medir.

No estima la pureza a partir de A260/A280, no convierte a molaridad y no elige un camino óptico distinto de la convención de un centímetro ya incorporada en el factor 50. Esas son búsquedas distintas. Una lectura de 0.50 en una dilución de diez pliegues produce, por tanto, 0.50 × 50 × 10 = 250 ng/µL de madre dsDNA; una lectura de 0.80 en una muestra sin diluir, factor de dilución 1, produce 40 ng/µL.

Introduzca el factor de dilución como 1 cuando haya medido la madre misma.

Dónde aporta valor una calculadora de concentración de ADN

Los laboratorios docentes y los cursos de biología molecular usan una calculadora de concentración de ADN para que el alumnado deje de tratar un A260 crudo como una concentración y pueda mostrar los 250 ng/µL que corresponden a una lectura de 0.50 en una dilución de miniprep de diez pliegues.

Las instalaciones centrales y los cuadernos de preparación de plásmidos mantienen la misma identidad junto a las impresiones del espectrofotómetro cuando un NanoDrop informa 0.82 en una dilución al doble y la madre que entra en una ligación es 82 ng/µL. Los scripts de clonación de alto rendimiento, las hojas de curva patrón de qPCR y los oráculos de deberes de un LMS necesitan un parse determinista que rechace una absorbancia nula o ausente en vez de multiplicar y devolver en silencio cero nanogramos.

Los sitios de contenido que posicionan por una calculadora de concentración de ADN se benefician de un control en vivo cuyo camino gratuito en el navegador coincide con el de automatización prepago sobre el mismo módulo puro, y no deben canibalizar la búsqueda distinta de una calculadora de masa inserto:vector en ligación: esa consulta quiere nanogramos de inserto a partir de longitudes de fragmento, no ng/µL a partir de un A260. La validación fallida no consume saldo.

Las búsquedas de concentración de RNA a 40 ng/µL por A260 o de factores de oligo cerca de 33 son intenciones distintas: quédese en esta página cuando el ácido nucleico sea ADN de doble cadena y la unidad de salida sea nanogramos por microlitro.