Calculadora de concentração de DNA

Uma calculadora de concentração de DNA converte uma leitura de espectrofotômetro a 260 nanômetros em nanogramas por microlitro pela identidade habitual do DNA de fita dupla: a concentração é A260 vezes 50 vezes o fator de diluição. Uma unidade de absorbância a 260 nm num caminho de um centímetro corresponde a 50 microgramas de dsDNA por mililitro, e essa cifra é numericamente idêntica a 50 nanogramas por microlitro, a unidade que cadernos de clonagem e de qPCR de fato pipetam. Se a cubeta ou o pedestal NanoDrop continha uma alíquota diluída, você multiplica pelo fator da diluição para que o resultado seja a concentração da solução estoque, não a do poço diluído.

Como A260 vira nanogramas por microlitro

Ácidos nucleicos absorvem luz ultravioleta com um pico perto de 260 nanômetros porque as bases aromáticas têm sistemas de ligações duplas conjugadas. Para o DNA de fita dupla, a convenção da comunidade, escrita em todo manual de clonagem molecular e em cada SOP de NanoDrop ou de cubeta, é que uma absorbância de 1.000 a 260 nm através de um caminho óptico de um centímetro corresponde a 50 microgramas de dsDNA por mililitro.

Microgramas por mililitro e nanogramas por microlitro são o mesmo número, então a identidade na bancada é concentração em ng/µL igual a A260 vezes 50. Quando a alíquota na cubeta ou no pedestal não é o estoque sem diluir — uma diluição 1-in-10 de uma miniprep, uma diluição 1-in-50 de uma limpeza PCR — você multiplica por esse fator para que a concentração informada seja o estoque que você vai pipetar depois, não o poço diluído que acabou de medir.

Não estima pureza a partir de A260/A280, não converte para molaridade e não escolhe um caminho óptico diferente da convenção de um centímetro já embutida no fator 50. Essas são buscas diferentes. Uma leitura de 0.50 numa diluição de dez vezes produz, portanto, 0.50 × 50 × 10 = 250 ng/µL de estoque dsDNA; uma leitura de 0.80 numa amostra sem diluir, fator de diluição 1, produz 40 ng/µL.

Informe o fator de diluição como 1 quando você mediu o próprio estoque.

Onde uma calculadora de concentração de DNA justifica o uso

Laboratórios de ensino e cursos de biologia molecular usam uma calculadora de concentração de DNA para que os aprendizes deixem de tratar um A260 cru como uma concentração e possam mostrar os 250 ng/µL que cabem com uma leitura de 0.50 numa diluição de miniprep de dez vezes. Instalações centrais e cadernos de preparo de plasmídeo mantêm a mesma identidade ao lado das impressões do espectrofotômetro quando um NanoDrop informa 0.82 numa diluição ao dobro e o estoque que entra numa ligação é 82 ng/µL.

Scripts de clonagem de alto volume, planilhas de curva-padrão de qPCR e oráculos de lição de um LMS precisam de um parse determinístico que recuse uma absorbância nula ou ausente em vez de multiplicar e devolver em silêncio zero nanogramas.

Sites de conteúdo que ranqueiam por uma calculadora de concentração de DNA se beneficiam de um controle ao vivo cujo caminho gratuito no navegador coincide com o de automação pré-paga no mesmo módulo puro, e não devem canibalizar a busca distinta de uma calculadora de massa inserto:vetor na ligação: essa consulta quer nanogramas de inserto a partir de comprimentos de fragmento, não ng/µL a partir de um A260. A validação falha não consome saldo.

Buscas de concentração de RNA a 40 ng/µL por A260 ou de fatores de oligo perto de 33 são intenções diferentes: fique nesta página quando o ácido nucleico for DNA de fita dupla e a unidade de saída for nanogramas por microlitro.