Volumes de diluição seriada

Uma calculadora de volumes de diluição seriada indica quantos microlitros de amostra você deve transferir e quanto diluente deve acrescentar em cada tubo para que cada passo multiplique a diluição pelo fator escolhido. Quem trabalha na bancada, monta placas ELISA, dá aulas práticas de microbiologia ou escreve scripts de preparo de ensaio precisa da mesma identidade: o volume de amostra é o volume do tubo dividido pelo fator de cada passo, e o volume de diluente é o restante. Uma série 1:10 em tubos de 1 000 µL é, portanto, 100 µL de amostra mais 900 µL de diluente, repetida ao longo da grade; uma curva ELISA em dobro em poços de 200 µL é 100 µL mais 100 µL. A concentração opcional de estoque, quando informada, anota cada tubo com C0 dividido pelo fator elevado ao índice do tubo, para que o caderno de laboratório imprima de uma só chamada os volumes de pipeta e os títulos esperados.

Como os volumes de amostra e diluente são calculados em cada tubo

Uma diluição seriada é uma cadeia de passos idênticos de mistura e transferência. Você enche todos os tubos até o mesmo volume final V, retira a mesma alíquota do tubo anterior (ou do estoque no tubo 1) e completa com diluente para que essa alíquota seja exatamente uma parte em f da mistura pronta. Esse é o fator de diluição por passo: o volume de amostra é V dividido por f, e o de diluente é V vezes (f menos 1) dividido por f.

Uma série de 10 vezes em tubos de 1 000 microlitros usa, portanto, 100 microlitros de amostra e 900 microlitros de diluente em cada tubo; uma curva ELISA em dobro em poços de 200 microlitros usa 100 mais 100. Depois de misturar o tubo i você transfere o mesmo volume de amostra para o tubo i mais 1, de modo que cada tubo intermediário fica com volume restante V menos a alíquota, numericamente igual ao volume de diluente.

O último tubo não é origem de outra transferência, então conserva o volume cheio. O fold acumulado no tubo i é f elevado a i, assim quatro passos de 10 vezes chegam a 10 000 vezes a partir do estoque e oito passos em dobro chegam a 256 vezes. Esta calculadora aplica essa identidade para qualquer fator finito maior que um e qualquer volume de tubo positivo, e lista cada tubo com a origem, os dois volumes de pipeta, a transferência de saída, o restante e o fold acumulado.

Ela não escolhe o tamanho da pipeta, o tempo de mistura nem a receita de tampão; isso pertence ao seu SOP. Também não inverte o problema em uma série só de concentrações: essa é outra busca, respondida por uma irmã que parte de um título de estoque e não de um volume de tubo.

Onde uma calculadora de volumes de diluição seriada justifica o uso

Laboratórios de ensino e cursos de microbiologia usam uma calculadora de volumes de diluição seriada para que o alunado deixe de chutar 100 mais 900 e possa mostrar a identidade para um fator e um volume de tubo arbitrários, inclusive o restante após a transferência ao tubo seguinte.

Cadernos de ELISA e de ensaios de potência mantêm a mesma aritmética em dobro ao lado do mapa da placa quando um poço de 200 microlitros precisa de 100 microlitros de amostra e 100 microlitros de diluente por oito passos, chegando a 256 vezes no último poço.

Scripts de ensaio de alto rendimento, grades de contagem CFU, folhas de curva padrão de qPCR e oráculos de tarefa de um LMS precisam de um parse determinístico que recuse um fator de um ou um volume de tubo ausente em vez de dividir por zero ou devolver Infinity em silêncio. Validação falha não consome saldo.