DNA-Konzentration berechnen

Ein Rechner für die DNA-Konzentration wandelt eine Spektralphotometer-Ablesung bei 260 Nanometern in Nanogramm je Mikroliter nach der üblichen Identität doppelsträngiger DNA um: die Konzentration ist A260 mal 50 mal dem Verdünnungsfaktor. Eine Absorptionseinheit bei 260 nm auf einem Weg von einem Zentimeter entspricht 50 Mikrogramm dsDNA je Milliliter, und diese Zahl ist numerisch identisch mit 50 Nanogramm je Mikroliter, der Einheit, die Klonierungs- und qPCR-Hefte wirklich pipettieren. Enthielt die Küvette oder der NanoDrop-Sockel eine verdünnte Aliquote, multiplizieren Sie mit dem Verdünnungsfaktor, damit das Ergebnis die Konzentration des Stocks ist, nicht die des verdünnten Näpfchens.

Wie aus A260 Nanogramm je Mikroliter werden

Nukleinsäuren absorbieren ultraviolettes Licht mit einem Maximum nahe 260 Nanometern, weil die aromatischen Basen konjugierte Doppelbindungssysteme haben. Für doppelsträngige DNA lautet die Gemeinschaftskonvention, festgehalten in jedem Handbuch der molekularen Klonierung und in jedem NanoDrop- oder Küvetten-SOP, dass eine Absorption von 1.000 bei 260 nm durch einen optischen Weg von einem Zentimeter 50 Mikrogramm dsDNA je Milliliter entspricht. Mikrogramm je Milliliter und Nanogramm je Mikroliter sind dieselbe Zahl, daher ist die Arbeitsidentität am Tisch Konzentration in ng/µL gleich A260 mal 50.

Wenn die Aliquote in der Küvette oder auf dem Sockel nicht der unverdünnte Stock ist — eine 1-in-10-Verdünnung einer Miniprep, eine 1-in-50-Verdünnung einer PCR-Aufreinigung — multiplizieren Sie mit jenem Faktor, damit die gemeldete Konzentration der Stock ist, den Sie später pipettieren, nicht das verdünnte Näpfchen, das Sie gerade gemessen haben. Er schätzt keine Reinheit aus A260/A280, rechnet nicht in Molarität um und wählt keinen anderen optischen Weg als die Ein-Zentimeter-Konvention, die bereits im Faktor 50 steckt. Das sind andere Suchen.

Eine Ablesung von 0.50 bei zehnfacher Verdünnung ergibt daher 0.50 × 50 × 10 = 250 ng/µL dsDNA-Stock; eine Ablesung von 0.80 an einer unverdünnten Probe, Verdünnungsfaktor 1, ergibt 40 ng/µL. Geben Sie den Verdünnungsfaktor als 1 ein, wenn Sie den Stock selbst gemessen haben.

Wo ein Rechner für die DNA-Konzentration seinen Nutzen hat

Lehrlabore und molekularbiologische Kurse nutzen einen Rechner für die DNA-Konzentration, damit Lernende ein rohes A260 nicht mehr als Konzentration behandeln und die 250 ng/µL zeigen können, die zu einer Ablesung von 0.50 bei zehnfacher Miniprep-Verdünnung gehören. Kernanlagen und Plasmid-Vorbereitungshefte halten dieselbe Identität neben Spektralphotometer-Ausdrucken, wenn ein NanoDrop 0.82 bei zweifacher Verdünnung meldet und der Stock, der in eine Ligation geht, 82 ng/µL beträgt. Hochdurchsatz-Klonierungsskripte, qPCR-Standardkurvenblätter und LMS-Hausaufgabenorakel brauchen ein deterministisches parse, das eine fehlende oder nullwertige Absorption ablehnt, statt durchzumultiplizieren und still null Nanogramm zurückzugeben.

Inhaltssites, die für einen Rechner der DNA-Konzentration rangieren, profitieren von einem lebenden Steuerelement, dessen kostenloser Browserpfad mit dem vorausbezahlten Automatisierungspfad auf demselben reinen Modul übereinstimmt, und sie sollen nicht die getrennte Suche nach einem Rechner der Ligations-Insert:Vektor-Masse kannibalisieren: jene Anfrage will Insert-Nanogramm aus Fragmentlängen, nicht ng/µL aus einem A260. Eine fehlgeschlagene Prüfung wird nicht berechnet. Verwandte Suchen nach RNA-Konzentration mit 40 ng/µL je A260 oder Oligofaktoren nahe 33 sind andere Absichten: Bleiben Sie auf dieser Seite, wenn die Nukleinsäure doppelsträngige DNA ist und die Ausgabeeinheit Nanogramm je Mikroliter.