Calculateur protéine Bradford
Passez d'une lecture Bradford à une concentration protéique : une absorbance de 0,42 sur une courbe de pente 0,035 et d'ordonnée à l'origine 0,05 donne un peu plus de dix et demi, dans l'unité de vos étalons. Les puits dilués sont corrigés. Gratuit dans votre navigateur.
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Exemple résolu
- Absorbance
- 0,42
- Pente
- 0,035
- Ordonnée à l'origine
- 0,05
- Dilution
- 1
- Concentration
- 10,5714285714
Le dosage protéique de Bradford reste l’une des méthodes colorimétriques les plus courantes pour quantifier la protéine totale dans des échantillons purifiés, des lysats et des intermédiaires de procédé. Après liaison du colorant, un spectrophotomètre signale l’absorbance—typiquement près de cinq cent quatre-vingt-quinze nanomètres—et le laboratoire convertit cette lecture en concentration à l’aide d’une courbe d’étalonnage construite à partir d’étalons protéiques connus tels que le BSA.
Comment l’absorbance Bradford devient une concentration protéique
Le bleu brillant de Coomassie G-250 déplace son spectre d’absorbance lorsqu’il se lie aux protéines dans des conditions acides de dosage, de sorte que les puits plus riches en protéine apparaissent plus bleus et lisent une absorbance plus élevée à la longueur d’onde du dosage. L’absorbance absolue seule n’est pas une concentration universelle : lot de colorant, température, longueur de trajet, composition protéique et blanc de l’instrument déplacent la réponse.
Les laboratoires préparent donc une série d’étalons à concentrations connues, mesurent leurs absorbances selon le même protocole que les inconnues, et ajustent un modèle linéaire de la forme absorbance égale pente fois concentration plus ordonnée sur la plage de travail linéaire. Une fois la pente m et l’ordonnée b connues, toute absorbance d’échantillon A s’inverse en concentration C égale à (A moins b) divisée par m.
Si l’échantillon a été dilué avant le dosage—par exemple cinq fois pour rester dans la courbe d’étalonnage—la concentration du stock non dilué est cette valeur inversée multipliée par le facteur de dilution. Cette capacité n’ajuste pas la courbe d’étalonnage pour vous, n’average pas les puits réplicats et n’applique pas de modèles logistiques à quatre paramètres non linéaires ; elle applique l’inversion linéaire en laquelle vous avez déjà confiance depuis un tableur ou le logiciel du lecteur de plaques.
La pente nulle est rejetée car la division par zéro ne peut pas récupérer la concentration. Des concentrations calculées légèrement négatives peuvent apparaître lorsqu’un échantillon bruyant se situe sous l’ordonnée ; l’arithmétique renvoie quand même le nombre pour que les scripts de contrôle qualité signalent les puits hors plage au lieu de les masquer par un écrêtage silencieux à zéro.
Flux de laboratoire, limites et intention de recherche de cet outil
Les fractions de purification protéique, les contrôles de charge égale de lysats cellulaires, la préparation d’échantillons ELISA et les laboratoires d’enseignement ont besoin de la même inversion déterministe sans rouvrir un tableur.
Limites : cet outil ne remplace pas le besoin d’étalons, ne corrige pas la réponse non linéaire du colorant à forte charge protéique, ne convertit pas entre équivalents BSA et masse réelle d’analyte pour chaque espèce protéique, et ne choisit pas les unités—les résultats sont dans les unités de concentration de la courbe d’étalonnage (souvent microgrammes par millilitre ou milligrammes par millilitre). Diluez les échantillons qui lisent au-dessus de l’étalon le plus élevé dans la plage linéaire et passez le facteur de dilution plutôt que d’extrapoler à l’aveugle.
L’intention de recherche de cette page inclut calculateur de concentration protéique Bradford, absorbance du dosage Bradford vers concentration, pente et ordonnée de courbe d’étalonnage protéique en ligne, et quantification protéique A595 par régression linéaire. Une validation échouée ne consomme pas le solde prépayé, si bien que les scripts exploratoires qui testent des pentes vides restent peu coûteux.
Cas d’usage
Fractions de purification et contrôles de charge
Convertissez chaque lecture Bradford A595 avec la pente et l’ordonnée de votre plaque en concentration pour fractions de colonne, charge protéique égale et libération d’intermédiaires de procédé.
Enseignement des courbes d’étalonnage Bradford
Montrez aux étudiants comment A = m·C + b s’inverse en C = (A − b)/m, et comment une dilution 1:5 multiplie par cinq la concentration du stock non dilué.
Questions fréquentes
Comment calculer la concentration protéique à partir d’un dosage Bradford ?
Envoyez une absorbance non négative plus la pente de la courbe d’étalonnage linéaire (non nulle) et l’ordonnée.
Que sont la pente et l’ordonnée à l’origine ?
Elles proviennent de l’ajustement de vos étalons protéiques : absorbance ≈ pente × concentration + ordonnée sur la plage linéaire. Utilisez le même blanc, la même longueur d’onde, le même trajet optique et les mêmes unités pour échantillons et étalons.
Quand renseigner le champ dilution ?
Lorsque l’absorbance a été mesurée sur une aliquote diluée. Pour une dilution 1:5, fixez dilution à 5 afin que le résultat estime le stock non dilué. Laissez 1 pour les échantillons non dilués.
Pourquoi une absorbance négative est-elle refusée ?
Une lecture négative après soustraction du blanc signale en général un blanc raté ou une mauvaise longueur d'onde, pas une quantité négative de protéine. Le calculateur la refuse au lieu d'en inverser le signe en silence.
Que se passe-t-il si la pente est nulle ?
Elle est refusée, car la concentration s'obtient en divisant par la pente, et une courbe plate ne peut pas convertir une absorbance en quantité. Refaites l'ajustement des étalons avant de réessayer.
Outils associés
Pour les développeurs — accès API
Tout sur cette page est disponible par programmation. Cette section s'adresse aux équipes qui veulent l'intégrer à leurs systèmes ; les autres peuvent simplement utiliser l'outil ci-dessus.
Endpoint
Authentification par jeton Bearer : un seul POST met la tâche en file d’attente, et le résultat vous parvient par webhook ou lien signé.
Appeler depuis votre stack
curl -X POST https://api.kit.forhosting.com/bio/bradford-protein \
-H "Authorization: Bearer $KIT_KEY" \
-H "Content-Type: application/json" \
-d '{"absorbance":0.42,"slope":0.035,"intercept":0.05}'const res = await fetch("https://api.kit.forhosting.com/bio/bradford-protein", {
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const { task_id } = await res.json();import os, requests
res = requests.post(
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headers={"Authorization": f"Bearer {os.environ['KIT_KEY']}"},
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task_id = res.json()["task_id"]<?php
$res = file_get_contents("https://api.kit.forhosting.com/bio/bradford-protein", false, stream_context_create([
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"header" => "Authorization: Bearer " . getenv("KIT_KEY") . "\r\nContent-Type: application/json",
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req.Header.Set("Authorization", "Bearer "+os.Getenv("KIT_KEY"))
req.Header.Set("Content-Type", "application/json")
res, _ := http.DefaultClient.Do(req)Exemple de requête
{
"absorbance": 0.42,
"slope": 0.035,
"intercept": 0.05
}Exemple de réponse
{
"task_id": "tsk_a1b2c3d4e5f6a1b2c3d4e5f6",
"type": "bio.bradford_protein",
"status": "queued",
"_links": {
"result": "/tasks/tsk_…/result"
}
}L’API est asynchrone : chaque appel renvoie un task_id immédiatement, puis vous interrogez l’état à raison d’une requête par seconde.
Tarifs
Le prix est publié, sans tokens ni crédits. Une tâche qui échoue n’est pas facturée.
Erreurs
| HTTP | Code | Signification |
|---|---|---|
401 | unauthorized | Clé API absente ou invalide : vérifiez l’en-tête Authorization. |
402 | insufficient_balance | Solde insuffisant : rechargez votre compte pour lancer cette tâche. |
404 | unknown_type | Type de tâche inconnu : vérifiez le champ type de votre requête. |
429 | rate_limited | Trop de requêtes : ralentissez la cadence, puis réessayez. |
Notes techniques
Ce calculateur de concentration protéique Bradford accepte l’absorbance d’échantillon corrigée du blanc ainsi que la pente et l’ordonnée à l’origine d’une courbe d’étalonnage linéaire ajustée A égale m fois C plus b, multiplie éventuellement par un facteur de dilution lorsque le puits mesuré a été dilué, et renvoie la concentration du stock avec un contrat numérique arrondi et stable. Une pente nulle, une absorbance négative et une dilution non positive échouent avec invalid_input au lieu d’inventer un titre.
Comment l’absorbance Bradford devient une concentration protéique
L’absorbance corrigée du blanc doit déjà être non négative avant l’appel API : une lecture négative signifie en général un mauvais blanc ou une mauvaise longueur d’onde, non une masse protéique négative, si bien que l’absorbance négative est rejetée plutôt qu’absolue en silence.
Contrat d’entrée, champs de réponse et règles de validation
Conservez pente et ordonnée du même ajustement, blanc, longueur d’onde et trajet optique que le puits d’échantillon ; mélanger des courbes entre instruments sans renormaliser fausse l’échelle de concentration même si l’arithmétique est correcte. Envoyez en POST un corps JSON avec trois nombres finis obligatoires et un facteur optionnel. L’absorbance obligatoire est la lecture d’échantillon corrigée du blanc—les alias incluent od, a595, sample_absorbance, abs et A—et doit être non négative. La pente obligatoire est le coefficient linéaire m non nul de A égale m fois C plus b, avec les alias m, standard_slope, curve_slope et calibration_slope ; les unités sont l’absorbance par unité de concentration et doivent correspondre à l’ajustement de l’ordonnée et des étalons. L’ordonnée obligatoire est l’ordonnée à l’origine finie b, avec les alias b, standard_intercept, curve_intercept et y_intercept ; elle peut être positive, négative ou nulle. La dilution optionnelle vaut un par défaut pour les mesures non diluées ; lorsqu’elle est présente, elle doit être un facteur de dilution fini et positif (alias dilution_factor, df, fold_dilution, dil). Exemple : absorbance zéro virgule quarante-deux, pente zéro virgule zéro trois cinq, ordonnée zéro virgule zéro cinq donne la concentration dix virgule cinq sept un quatre deux huit cinq sept un quatre deux neuf dans les unités de la courbe d’étalonnage ; la même absorbance sur une aliquote diluée cinq fois avec dilution cinq multiplie cette valeur inversée par cinq pour le stock non dilué. En cas de succès, la réponse renvoie absorbance, slope, intercept et dilution avec un arrondi stable à douze décimales, plus concentration comme résultat numérique principal, formula indiquant si la dilution était unitaire, et message comme bref résumé en anglais. Champs manquants, chaînes non finies, types booléens, absorbance négative, pente nulle et dilution non positive échouent avec invalid_input et ne sont pas facturés. Le prix du travail réussi est un $0.002 fixe avec l’unité item.
Flux de laboratoire, limites et intention de recherche de cet outil
Flux typique : exécutez des étalons BSA ou d’une autre protéine, ajustez la région linéaire pour obtenir pente et ordonnée, corrigez du blanc l’absorbance de l’échantillon, saisissez ces trois nombres, indiquez la dilution lorsque l’aliquote mesurée a été diluée, et enregistrez la concentration à côté de l’identifiant d’échantillon. Les scripts d’automatisation peuvent stocker pente et ordonnée par plaque ou par lot de kit et appeler l’API après chaque capture d’absorbance. Les contrôles aller-retour sont simples : recalculez (absorbance moins ordonnée) divisée par la pente fois la dilution et confirmez l’égalité avec concentration dans l’arrondi publié, puis confirmez qu’une pente nulle ou une absorbance négative fait passer la réponse de succès à invalid_input avec un message de champ clair.
Cas d'intégration
Automatisation LIMS et lecteurs de plaques
Acheminez les valeurs d’absorbance de spectrophotomètre ou de microplaque vers une inversion fixe de courbe d’étalonnage linéaire stockée par lot de kit, avec dilution lorsque les puits ont été pré-dilués.
Questions techniques
Pourquoi ma demande a-t-elle été rejetée ?
Absorbance négative, pente nulle, dilution non positive, champs manquants ou valeurs non finies échouent avec invalid_input et ne sont pas facturés.
Combien coûte le calculateur de concentration protéique Bradford ?
L’outil navigateur est gratuit. Les requêtes API utilisent le solde prépayé KIT à $0.002 par appel réussi ; une entrée invalide n’est pas facturée.