Calculateur d'efficacité qPCR
Vérifiez un essai de qPCR à partir de sa courbe standard : une pente de −3,32 correspond à une efficacité à peine supérieure à 100 %, avec un facteur de 2,000805254556 par cycle, le produit doublant presque à chaque tour. Gratuit dans votre navigateur.
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Exemple résolu
- Pente
- -3,32
- Efficacité (%)
- 100,0805254556 %
- Efficacité
- 1,0008052546
- Facteur d'amplification
- 2,0008052546
La PCR quantitative (qPCR) rapporte un cycle de quantification (Cq ou Ct) qui, pour un essai exponentiel bien élevé, varie linéairement avec le logarithme en base dix de la quantité initiale de matrice. La pente de cette courbe d'étalonnage n'est pas un coefficient décoratif : elle encode l'efficacité d'amplification par cycle via l'identité sous forme close E égale dix à la puissance moins un sur la pente, moins un. Ce calculateur d'efficacité qPCR applique cette identité exactement. Indiquez la pente ajustée de Ct versus log10(concentration) ou log10(nombre de copies) et la tâche renvoie l'efficacité en pour cent, la fraction adimensionnelle E et le facteur d'amplification par cycle dix à la puissance moins un sur la pente. Une pente voisine de −3.32 correspond à cent pour cent, soit un doublement parfait à chaque cycle.
Ce que la pente d'étalonnage signifie pour l'efficacité qPCR
La réaction en chaîne par polymérase quantitative, aussi appelée PCR en temps réel, mesure la fluorescence à chaque cycle et rapporte un cycle de quantification Cq (historiquement Ct) auquel le signal franchit un seuil choisi. Lorsqu'une série de dilutions d'une matrice connue est menée dans des conditions identiques, le tracé de Cq versus le logarithme en base dix de la concentration ou du nombre de copies initiales est la courbe d'étalonnage. Dans le régime exponentiel cette droite est linéaire, et sa pente estime expérimentalement l'efficacité d'amplification par cycle.
Multiplier E par cent exprime l'efficacité en pour cent, c'est ainsi que les articles de méthode, les listes MIQE et les notices de kit rapportent la performance de l'essai. Un doublement parfait signifie que chaque cycle multiplie le produit par deux, si bien que un plus E vaut deux, E vaut un et l'efficacité est cent pour cent. Résoudre dix à la puissance moins un sur la pente égale deux donne une pente égale à moins log10 de deux, environ −3.321928.
Des pentes plus douces telles que −3.10 impliquent des efficacités au-dessus de cent pour cent ; des pentes plus raides telles que −3.58 impliquent des efficacités voisines de quatre-vingt-dix pour cent. Ce calculateur n'ajuste pas les points Cq, n'estime pas R-squared et n'inverse pas un Cq vers la quantité de départ : il convertit une pente déjà ajustée en E et en E pour cent par une évaluation déterministe en virgule flottante que vous pouvez figer dans des tests et dans le carnet électronique.
Contrat d'entrée, champs de réponse et validation
L'exemple classique de manuel, pente −3.32, renvoie un pour cent très proche de cent, car dix à la puissance un sur 3.32 dépasse juste deux. Une pente de −3.58 est l'exemple de cours habituel près de quatre-vingt-dix pour cent. Une pente exactement nulle est rejetée parce que moins un sur la pente est indéfini : le message indique que la pente de la courbe d'étalonnage est nulle.
Une pente trop proche de zéro pour que la puissance déborde vers un nombre non fini est également rejetée. Une validation échouée n'est pas facturée. Les pentes qPCR typiques sont négatives ; une pente positive est mathématiquement définie et est renvoyée plutôt que devinée, mais elle est inhabituelle pour une série de dilutions où Cq augmente lorsque la matrice diminue.
Flux d'essai, fenêtres d'acceptation et intention de recherche
Les développeurs de méthodes utilisent quatre-vingt-dix à cent dix pour cent comme fenêtre d'acceptation courante pour un nouvel essai à sonde d'hydrolyse ou SYBR ; des valeurs très hors de cette bande signalent des dimères d'amorces, un biais de pipetage, une inhibition ou un ajustement non linéaire.
Les laboratoires d'enseignement peuvent fixer la pente idéale à moins log10 de deux pour que les étudiants voient cent pour cent, puis la déplacer à −3.6 ou −3.1 afin de montrer qu'un petit changement de pente se traduit par un grand changement de E, car la carte est exponentielle. Limites : cet outil n'ajuste pas les points, ne calcule ni R-squared ni l'ordonnée à l'origine, ne convertit pas un Cq en copies et n'applique pas un facteur de quantification relative de Pfaffl.
Une validation échouée ne consomme pas le solde prépayé.
Cas d’usage
Validation d'essai et rapports MIQE
Convertissez la pente d'étalonnage ajustée par l'instrument en un pour cent d'efficacité pour les dossiers de validation, les notices de kit et les rapports de performance qPCR de style MIQE.
Enseigner l'identité 10^(-1/slope)
Montrez aux étudiants qu'une pente d'environ −3.32 est un doublement à 100 %, puis passez à −3.58 ou −3.10 pour qu'ils voient comment E se déplace sans réajuster une plaque.
Questions fréquentes
Comment calculer l'efficacité d'amplification qPCR à partir de la pente d'étalonnage ?
Envoyez la pente ajustée de Cq (ou Ct) versus log10(quantité).
Quelle pente correspond à 100 % d'efficacité qPCR ?
Une pente de −3.32 est le substitut habituel des manuels et donne un pour cent très proche de 100.
Cet outil ajuste-t-il mes points de dilution Cq ?
Non. Il convertit une pente déjà ajustée. Ajustez d'abord Cq versus log10(quantité) dans le logiciel de l'instrument ou le carnet, puis saisissez cette pente ici.
Quelle plage d’efficacité de qPCR est généralement acceptée ?
Beaucoup de concepteurs de méthodes acceptent environ 90 à 110 % pour un nouvel essai à sonde ou SYBR. Des valeurs très éloignées signalent souvent des dimères d’amorces, des erreurs de pipetage, une inhibition ou une courbe ajustée hors de sa zone linéaire.
Que signifie une efficacité supérieure à 100 % ?
Elle provient d’une pente moins raide qu’environ −3,321928, comme −3,10. Ce ne sont pas des copies en plus : cela révèle souvent une inhibition dans les étalons concentrés, des erreurs de pipetage ou des dimères d’amorces qui déforment la courbe.
Outils associés
Pour les développeurs — accès API
Tout sur cette page est disponible par programmation. Cette section s'adresse aux équipes qui veulent l'intégrer à leurs systèmes ; les autres peuvent simplement utiliser l'outil ci-dessus.
Endpoint
Authentification par jeton Bearer : un seul POST met la tâche en file d’attente, et le résultat vous parvient par webhook ou lien signé.
Appeler depuis votre stack
curl -X POST https://api.kit.forhosting.com/bio/qpcr-efficiency \
-H "Authorization: Bearer $KIT_KEY" \
-H "Content-Type: application/json" \
-d '{"slope":-3.32}'const res = await fetch("https://api.kit.forhosting.com/bio/qpcr-efficiency", {
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headers: {
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"Content-Type": "application/json"
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const { task_id } = await res.json();import os, requests
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task_id = res.json()["task_id"]<?php
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"method" => "POST",
"header" => "Authorization: Bearer " . getenv("KIT_KEY") . "\r\nContent-Type: application/json",
"content" => '{"slope":-3.32}',
],
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req, _ := http.NewRequest("POST", "https://api.kit.forhosting.com/bio/qpcr-efficiency", body)
req.Header.Set("Authorization", "Bearer "+os.Getenv("KIT_KEY"))
req.Header.Set("Content-Type", "application/json")
res, _ := http.DefaultClient.Do(req)Exemple de requête
{
"slope": -3.32
}Exemple de réponse
{
"task_id": "tsk_a1b2c3d4e5f6a1b2c3d4e5f6",
"type": "bio.qpcr_efficiency",
"status": "queued",
"_links": {
"result": "/tasks/tsk_…/result"
}
}L’API est asynchrone : chaque appel renvoie un task_id immédiatement, puis vous interrogez l’état à raison d’une requête par seconde.
Tarifs
Le prix est publié, sans tokens ni crédits. Une tâche qui échoue n’est pas facturée.
Erreurs
| HTTP | Code | Signification |
|---|---|---|
401 | unauthorized | Clé API absente ou invalide : vérifiez l’en-tête Authorization. |
402 | insufficient_balance | Solde insuffisant : rechargez votre compte pour lancer cette tâche. |
404 | unknown_type | Type de tâche inconnu : vérifiez le champ type de votre requête. |
429 | rate_limited | Trop de requêtes : ralentissez la cadence, puis réessayez. |
Notes techniques
Une pente nulle ou non finie est indéfinie et échoue avec invalid_input.
Ce que la pente d'étalonnage signifie pour l'efficacité qPCR
L'identité des manuels est E égale dix à la puissance moins un sur la pente, moins un, souvent écrite E = 10^(-1/slope) − 1.
Contrat d'entrée, champs de réponse et validation
Envoyez par POST un corps JSON avec slope obligatoire comme nombre fini non nul : la pente ajustée de Cq ou Ct versus log10 de la quantité de départ. Les alias acceptés par le même champ comprennent m, standard_curve_slope, curve_slope, standard_slope, cq_slope et ct_slope. En cas de succès la réponse renvoie slope avec un arrondi stable à douze décimales, plus efficiency_percent comme résultat principal, efficiency comme la fraction E, amplification_factor comme dix à la puissance moins un sur la pente (égal à un plus E), unit comme le signe pour cent, formula qui répète E = 10^(-1/slope) − 1, et un message bref. Un slope manquant, des chaînes vides, des types booléens, NaN et Infinity échouent avec invalid_input en nommant le champ. Le travail réussi est tarifé à un forfait $0.002 avec unit item.
Flux d'essai, fenêtres d'acceptation et intention de recherche
Flux typique : réalisez une dilution décimale à cinq ou six points d'un étalon quantifié, ajustez Cq contre log10 de la concentration ou du nombre de copies dans le logiciel de l'instrument ou un carnet, copiez la pente rapportée dans ce calculateur et consignez efficiency_percent à côté de l'identifiant de l'essai. Les scripts d'automatisation peuvent stocker une pente par plaque ou par paire d'amorces et appeler l'API après chaque ajustement de courbe d'étalonnage sans ouvrir un tableur. L'intention de recherche de cette page comprend calculateur d'efficacité qPCR, efficacité d'amplification qPCR depuis la pente d'étalonnage, pour cent d'efficacité de PCR en temps réel et E = 10^(-1/slope) − 1. Les contrôles aller-retour sont directs : recalculez dix à la puissance moins un sur la pente, soustrayez un, multipliez par cent et confirmez l'égalité avec efficiency_percent dans l'arrondi publié, puis confirmez qu'une pente nulle fait passer la réponse du succès à invalid_input avec un message de champ clair.
Cas d'intégration
LIMS et seuils de QC par plaque
Injectez la pente ajustée de chaque plaque dans un contrôle API déterministe et signalez les séries dont efficiency_percent sort d'une fenêtre de laboratoire de 90–110 %.
Questions techniques
Pourquoi ma demande a-t-elle été rejetée ?
Un slope manquant, une valeur non finie (NaN ou Infinity) ou une pente exactement nulle échouent avec invalid_input et ne sont pas facturés. Une pente nulle rend 10^(-1/slope) indéfini.
Combien coûte le calculateur d'efficacité qPCR ?
L'outil du navigateur est gratuit. Les requêtes API utilisent le solde prépayé KIT à $0.002 par appel réussi ; une entrée invalide n'est pas facturée.