Calculadora de eficiencia qPCR
Revise un ensayo de qPCR a partir de su curva estándar: una pendiente de −3,32 equivale a una eficiencia apenas superior al 100 %, con un factor de 2,000805254556 por ciclo, es decir, el producto casi se duplica en cada ronda. Gratis en su navegador.
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Ejemplo resuelto
- Pendiente
- -3,32
- Eficiencia (%)
- 100,0805254556 %
- Eficiencia
- 1,0008052546
- Factor de amplificación
- 2,0008052546
La PCR cuantitativa (qPCR) informa un ciclo de cuantificación (Cq o Ct) que, en un ensayo exponencial bien comportado, escala de forma lineal con el logaritmo en base diez de la cantidad inicial de molde. La pendiente de esa curva patrón no es un coeficiente decorativo: cifra la eficiencia de amplificación por ciclo mediante la identidad de forma cerrada E igual a diez elevado a menos uno partido por la pendiente, menos uno. Esta calculadora de eficiencia qPCR aplica esa identidad con exactitud. Indique la pendiente ajustada de Ct frente a log10(concentración) o log10(número de copias) y la tarea devuelve la eficiencia en por ciento, la fracción adimensional E y el factor de amplificación por ciclo diez elevado a menos uno partido por la pendiente. Una pendiente próxima a −3.32 corresponde al cien por ciento, la duplicación perfecta en cada ciclo.
Qué significa la pendiente de la curva patrón para la eficiencia qPCR
La reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa, también llamada PCR en tiempo real, mide la fluorescencia en cada ciclo e informa un ciclo de cuantificación Cq (históricamente Ct) en el que la señal cruza un umbral elegido. Cuando se corre una serie de diluciones de molde conocido en condiciones idénticas, el gráfico de Cq frente al logaritmo en base diez de la concentración o del número de copias iniciales es la curva patrón.
En el régimen exponencial esa recta es lineal y su pendiente estima de forma experimental la eficiencia de amplificación por ciclo. Multiplicar E por cien expresa la eficiencia en por ciento, que es como los artículos de método, las listas MIQE y los prospectos de kit comunican el rendimiento del ensayo. La duplicación perfecta significa que cada ciclo multiplica el producto por dos, de modo que uno más E vale dos, E vale uno y la eficiencia es cien por ciento.
Resolver diez elevado a menos uno partido por la pendiente igual a dos da pendiente igual a menos log10 de dos, unos −3.321928. Pendientes más suaves, como −3.10, implican eficiencias por encima del cien por ciento; pendientes más empinadas, como −3.58, implican eficiencias próximas al noventa por ciento.
Esta calculadora no ajusta puntos Cq, no estima R-squared ni invierte un Cq hacia la cantidad inicial: convierte una pendiente ya ajustada en E y en E por ciento con una evaluación determinista de coma flotante que usted puede fijar en pruebas y en el cuaderno electrónico.
Contrato de entrada, campos de respuesta y validación
El ejemplo clásico de manual, pendiente −3.32, devuelve un por ciento muy próximo a cien, porque diez elevado a uno partido por 3.32 queda justo por encima de dos. Una pendiente de −3.58 es el ejemplo de aula habitual cerca del noventa por ciento. Una pendiente exactamente cero se rechaza porque menos uno partido por la pendiente no está definido: el mensaje indica que la pendiente de la curva patrón es cero.
También se rechaza una pendiente tan próxima a cero que la potencia desborda a un número no finito. La validación fallida no se factura. Las pendientes típicas de qPCR son negativas; una pendiente positiva está definida en matemáticas y se devuelve en lugar de inventar un signo, pero es inusual en una serie de dilución en la que Cq aumenta cuando el molde disminuye.
Qué puede hacer con ella
Validación de ensayo e informes MIQE
Convierta la pendiente de la curva patrón ajustada por el instrumento en un por ciento de eficiencia para paquetes de validación, prospectos de kit e informes de rendimiento qPCR al estilo MIQE.
Enseñar la identidad 10^(-1/slope)
Muestre al alumnado que una pendiente de unos −3.32 es duplicación al 100% y luego cámbiela a −3.58 o −3.10 para que vean cómo se mueve E sin reajustar una placa.
Preguntas frecuentes
¿Cómo calculo la eficiencia de amplificación qPCR a partir de la pendiente de la curva patrón?
Envíe la pendiente ajustada de Cq (o Ct) frente a log10(cantidad).
¿Qué pendiente corresponde al 100% de eficiencia qPCR?
Una pendiente de −3.32 es el sustituto habitual de los manuales y da un por ciento muy próximo a 100.
¿Esta herramienta ajusta mis puntos de dilución Cq?
No. Convierte una pendiente ya ajustada. Ajuste primero Cq frente a log10(cantidad) en el software del instrumento o en el cuaderno y luego indique esa pendiente aquí.
¿Qué rango de eficiencia de qPCR se suele aceptar?
Muchos desarrolladores de métodos aceptan aproximadamente del 90 al 110 % para un ensayo nuevo con sonda o SYBR. Los valores muy alejados suelen indicar dímeros de cebadores, errores de pipeteo, inhibición o una curva ajustada fuera de su zona lineal.
¿Qué significa una eficiencia superior al 100 %?
Proviene de una pendiente menos inclinada que unos −3,321928, como −3,10. No indica copias extra: suele revelar inhibición en los patrones concentrados, errores de pipeteo o dímeros de cebadores que deforman la curva.
Herramientas relacionadas
Para desarrolladores — acceso por API
Todo lo de esta página está disponible por programación. Esta sección es para equipos que quieren integrarlo en sus sistemas; el resto puede usar la herramienta de arriba sin más.
Endpoint de API
¿Prefiere automatizarlo? Un POST autenticado crea la tarea; el resultado llega por webhook o enlace firmado. La misma capacidad también se ejecuta aquí en la web, por email y desde Telegram — y pronto también desde nuestra app.
Llámela desde su stack
curl -X POST https://api.kit.forhosting.com/bio/qpcr-efficiency \
-H "Authorization: Bearer $KIT_KEY" \
-H "Content-Type: application/json" \
-d '{"slope":-3.32}'const res = await fetch("https://api.kit.forhosting.com/bio/qpcr-efficiency", {
method: "POST",
headers: {
"Authorization": `Bearer ${process.env.KIT_KEY}`,
"Content-Type": "application/json"
},
body: JSON.stringify({
"slope": -3.32
})
});
const { task_id } = await res.json();import os, requests
res = requests.post(
"https://api.kit.forhosting.com/bio/qpcr-efficiency",
headers={"Authorization": f"Bearer {os.environ['KIT_KEY']}"},
json={
"slope": -3.32
},
)
task_id = res.json()["task_id"]<?php
$res = file_get_contents("https://api.kit.forhosting.com/bio/qpcr-efficiency", false, stream_context_create([
"http" => [
"method" => "POST",
"header" => "Authorization: Bearer " . getenv("KIT_KEY") . "\r\nContent-Type: application/json",
"content" => '{"slope":-3.32}',
],
]));
$task = json_decode($res, true);body := bytes.NewBufferString(`{"slope":-3.32}`)
req, _ := http.NewRequest("POST", "https://api.kit.forhosting.com/bio/qpcr-efficiency", body)
req.Header.Set("Authorization", "Bearer "+os.Getenv("KIT_KEY"))
req.Header.Set("Content-Type", "application/json")
res, _ := http.DefaultClient.Do(req)Ejemplo de solicitud
{
"slope": -3.32
}Ejemplo de respuesta
{
"task_id": "tsk_a1b2c3d4e5f6a1b2c3d4e5f6",
"type": "bio.qpcr_efficiency",
"status": "queued",
"_links": {
"result": "/tasks/tsk_…/result"
}
}La API es asíncrona: la llamada devuelve un task_id al instante y el resultado llega por webhook. El polling está limitado a 1 req/s por tarea.
Precio
Precio publicado — sin tokens ni créditos inventados. Una tarea fallida no se cobra.
Errores
| HTTP | Código | Significado |
|---|---|---|
401 | unauthorized | API key ausente o inválida. |
402 | insufficient_balance | El saldo no cubre el precio de la tarea. |
404 | unknown_type | El tipo de tarea no existe. |
429 | rate_limited | Demasiadas peticiones. Use el webhook en vez de sondear. |
Notas técnicas
Una pendiente nula o no finita es indefinida y falla con invalid_input.
Qué significa la pendiente de la curva patrón para la eficiencia qPCR
La identidad de los manuales es E igual a diez elevado a menos uno partido por la pendiente, menos uno, que suele escribirse E = 10^(-1/slope) − 1.
Contrato de entrada, campos de respuesta y validación
Envíe por POST un cuerpo JSON con slope obligatorio como número finito distinto de cero: la pendiente ajustada de Cq o Ct frente a log10 de la cantidad inicial. Los alias aceptados por el mismo campo incluyen m, standard_curve_slope, curve_slope, standard_slope, cq_slope y ct_slope. En caso de éxito la respuesta devuelve slope con redondeo estable a doce decimales, más efficiency_percent como resultado principal, efficiency como la fracción E, amplification_factor como diez elevado a menos uno partido por la pendiente (igual a uno más E), unit como el signo de por ciento, formula que reitera E = 10^(-1/slope) − 1, y un message breve. Si falta slope, o hay cadenas vacías, tipos booleanos, NaN e Infinity, la tarea falla con invalid_input nombrando el campo. El trabajo exitoso se cobra a un fijo $0.002 con unit item.
Flujos de ensayo, ventanas de aceptación e intención de búsqueda
Quienes desarrollan métodos usan del noventa al ciento diez por ciento como ventana habitual de aceptación para un ensayo nuevo de sonda de hidrólisis o SYBR; valores muy fuera de esa banda señalan dímeros de cebador, sesgo de pipeteo, inhibición o un ajuste no lineal. Los laboratorios docentes pueden fijar la pendiente ideal en menos log10 de dos para que el alumnado vea cien por ciento y luego moverla a −3.6 o −3.1 para mostrar cómo un cambio pequeño de pendiente se traduce en un cambio grande de E, porque el mapa es exponencial. Límites: esta herramienta no ajusta los puntos, no calcula R-squared ni la ordenada en el origen, no convierte Cq a copias y no aplica un cambio de pliegue de cuantificación relativa de Pfaffl. Flujo típico: corra una dilución decimal de cinco o seis puntos de un estándar cuantificado, ajuste Cq frente a log10 de la concentración o del número de copias en el software del instrumento o en un cuaderno, copie la pendiente informada en esta calculadora y anote efficiency_percent junto al identificador del ensayo. Los scripts de automatización pueden guardar una pendiente por placa o por par de cebadores y llamar a la API tras cada ajuste de curva patrón sin abrir una hoja de cálculo. La intención de búsqueda de esta página incluye calculadora de eficiencia qPCR, eficiencia de amplificación qPCR desde la pendiente de la curva patrón, por ciento de eficiencia de PCR en tiempo real y E = 10^(-1/slope) − 1. La validación fallida no consume saldo prepago. Las comprobaciones de ida y vuelta son directas: vuelva a calcular diez elevado a menos uno partido por la pendiente, reste uno, multiplique por cien y confirme la igualdad con efficiency_percent dentro del redondeo publicado; luego confirme que una pendiente cero pasa la respuesta de éxito a invalid_input con un mensaje de campo claro.
Casos de integración
LIMS y umbrales de QC por placa
Encauce la pendiente ajustada de cada placa a una comprobación API determinista y marque las corridas cuyo efficiency_percent quede fuera de una ventana de laboratorio del 90–110%.
Preguntas técnicas
¿Por qué se rechazó mi solicitud?
Si falta slope, el valor no es finito (NaN o Infinity) o la pendiente es exactamente cero, la tarea falla con invalid_input y no se factura. Una pendiente cero deja 10^(-1/slope) indefinido.
¿Cuánto cuesta la calculadora de eficiencia qPCR?
La herramienta del navegador es gratuita. Las peticiones API usan saldo prepago KIT a $0.002 por llamada exitosa; la entrada inválida no se factura.