Calcolatore concentrazione proteica

La concentrazione proteica è il numero di cui ha bisogno ogni flusso di purificazione, controllo di carico e preparazione di saggi, e la maggior parte dei laboratori la ottiene ancora da una lettura di spettrofotometro più una curva standard lineare. Dopo aver misurato un’assorbanza corretta con bianco e adattato standard proteici noti ad assorbanza uguale a pendenza per concentrazione più intercetta, l’inversione è una sola divisione: la concentrazione in milligrammi per millilitro è l’assorbanza meno l’intercetta, divisa per la pendenza. Questo calcolatore di concentrazione proteica accetta quei tre numeri finiti, rifiuta una pendenza nulla che non può invertire la curva e restituisce un risultato stabile in milligrammi per millilitro che coincide con la stessa aritmetica che applicherebbe un taccuino o il software di un lettore di piastre. È indipendente dal saggio: Bradford, BCA, Lowry e molte curve standard ultraviolette condividono questa inversione lineare una volta note pendenza e intercetta.

Come una curva standard lineare diventa milligrammi per millilitro

La maggior parte dei saggi proteici colorimetrici e spettrofotometrici converte un’assorbanza misurata in concentrazione con una curva standard anziché con un unico coefficiente di estinzione universale. Si pipettano masse note di uno standard proteico come l’albumina sierica bovina nello stesso reagente e cammino ottico delle incognite, si legge l’assorbanza alla lunghezza d’onda del saggio e si adatta l’intervallo lineare di lavoro ad assorbanza uguale a pendenza per concentrazione più intercetta.

La pendenza m ha allora unità di assorbanza per milligrammo per millilitro quando gli standard sono stati preparati in milligrammi per millilitro; l’intercetta b è l’assorbanza adattata a proteina zero e assorbe residui di bianco, reagente e cammino ottico che un bianco perfetto non ha rimosso. Noti quei due numeri, qualsiasi assorbanza di campione A si inverte nella concentrazione C uguale ad A meno b, divisa per m, e questo calcolatore riporta quella C in milligrammi per millilitro.

L’inversione è la stessa aritmetica di BCA, Lowry, legame del colorante Bradford, Pierce six-sixty e molte curve standard ultraviolette: la chimica del colorante cambia la pendenza, non l’algebra. Questo strumento non adatta la curva per Lei, non media pozzetti replica e non applica modelli logistici a quattro parametri; applica l’inversione lineare di cui già si fida da foglio di calcolo o software del lettore di piastre. La pendenza zero viene rifiutata perché la divisione per zero non recupera un titolo.

Concentrazioni calcolate leggermente negative possono comparire quando un campione rumoroso resta sotto l’intercetta; l’aritmetica restituisce comunque il numero così che gli script di controllo qualità segnalino pozzetti fuori intervallo invece di nasconderli con un clamp silenzioso a zero. Mantenga pendenza e intercetta dello stesso adattamento, bianco, lunghezza d’onda e cammino ottico della lettura del campione; mescolare curve tra strumenti senza rinormalizzare distorce la scala anche quando l’aritmetica è corretta.

Flussi di laboratorio, limiti e intenti di ricerca di questo strumento

Flusso tipico: esegua standard proteici in milligrammi per millilitro, adatti la regione lineare per ottenere pendenza e intercetta, corregga con bianco l’assorbanza del campione, inserisca quei tre numeri e registri la concentrazione in milligrammi per millilitro accanto all’identificatore del campione. Frazioni di purificazione, controlli di carico uguale di lisati cellulari, preparazione di saggi enzimatici e laboratori didattici necessitano della stessa inversione deterministica senza riaprire un foglio di calcolo.

Limiti: questo strumento non sostituisce la necessità di standard, non corregge la risposta non lineare del colorante ad alto carico proteico, non converte tra equivalenti BSA e massa reale dell’analita per ogni specie proteica, e riporta sempre milligrammi per millilitro—se la curva è stata adattata in microgrammi per millilitro, ricalibri la pendenza prima di chiamare. Diluisca i campioni che leggono sopra lo standard più alto nell’intervallo lineare invece di estrapolare alla cieca.

L’intento di ricerca di questa pagina include calcolatore di concentrazione proteica, assorbanza a mg/mL da una curva standard, pendenza e intercetta di curva standard proteica online, e quantificazione colorimetrica delle proteine da regressione lineare. La validazione fallita non consuma il saldo prepagato, così gli script esplorativi che provano pendenze vuote restano economici.